Page 22 - 南京医科大学学报自然科学版

第42卷第6期
·774 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2022年6月

A Lig组 B C
假手术组 Dig组 5 mg/kg 10 mg/kg 20 mg/kg 1.0 *** *** 4 * ***
模型组

MFN1 90 kDa MFN1 蛋白相对表达量 1.5 *** *** DRP1 蛋白相对表达量 6 2 *** ***
0.5
DRP1 75 kDa ***
0 0
20 mg/kg
P62 62 kDa 模型组 Dig组 模型组 Dig组
LC3Ⅱ 假手术组 5 mg/kg 10 mg/kg 假手术组 5 mg/kg 10 mg/kg 20 mg/kg
LC3Ⅰ 14 kDa
Lig组 Lig组
GAPDH 37 kDa
D E ***
蛋白相对表达量 10 8 6 ** 蛋白相对表达量 2.5 ** *** ***
2.0
1.5
P62 4 *** *** LC3Ⅱ/LC3Ⅰ 1.0 *

0 2 *** 0.5 0
假手术组 模型组 Dig组 5 mg/kg 10 mg/kg 20 mg/kg 假手术组 模型组 Dig组 5 mg/kg 10 mg/kg 20 mg/kg

Lig组 Lig组
A：Western blot 检测各组心肌线粒体动力学和自噬相关蛋白表达；B：各组MFN1蛋白表达比较；C：各组DRP1蛋白表达比较；D：各组P62
蛋白表达比较；E：各组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值比较。与模型组比较，P < 0.05，P < 0.01， P < 0.001（n=3）。
**
*
***
图5 Lig对心肌梗死模型大鼠心肌线粒体动力学和自噬相关蛋白表达的影响
Figure 5 Effects of Lig on the expression of myocardial proteins associated with mitochondrial dynamics and autophagy in
rats with myocardial infarction

比，模型组（OGD 组）中 MFN1 的表达减少，DRP1 的 2.10 联用自噬激动剂或抑制剂观察Lig 对OGD 模
表达升高，LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值降低，P62 的表达升 型H9C2细胞线粒体膜电位的影响
高；相较于 OGD 组，Lig 处理的 OGD+Lig 组 MFN1 表 荧光结果显示，相较于对照组，模型组线粒体
达水平显著升高，DRP1表达降低。LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比 膜电位显著降低。Lig组和联用Rapa组线粒体膜电
值升高，P62表达降低（图7）。这些改变与在体组织 位相较于模型组显著升高，而Lig+自噬抑制剂3⁃MA
中蛋白表达的变化相一致。 组线粒体膜电位相较于模型组无明显差异（图
2.8 Lig 对 OGD 模型 H9C2 细胞线粒体自噬相关蛋 10）。在自噬抑制剂同时给药时，Lig 保护线粒体膜
白表达的影响 电位的作用被抑制。
与对照组相比，模型组（OGD组）线粒体自噬相 2.11 联用自噬激动剂或抑制剂观察Lig 对OGD 模
关蛋白PINK1、Parkin、BNIP3的表达水平显著降低， 型H9C2细胞ROS水平和细胞凋亡的影响
FUNDC1 的水平明显升高；相比于模型组，Lig 处理 通过荧光标记来检测H9C2细胞的ROS水平和
的 OGD+Lig 组 PINK1、Parkin、BNIP3 的表达水平明 凋亡（图11），OGD模型组ROS荧光强度和细胞凋亡
显上升，FUNDC1 的表达水平显著下降。OGD+Lig 比例相较于空白对照组明显升高，而给予 Lig 和同
组自噬相关蛋白的表达总体高于OGD组（图8）。 时给予 Lig 和自噬激动剂 Rapa 的两组，ROS 水平和

2.9 联用自噬激动剂和抑制剂观察 Lig 对 H9C2 细 细胞凋亡比例相比于模型组明显降低，同时给予
胞线粒体自噬溶酶体形成的影响 Lig+自噬抑制剂 3⁃MA 的组别，与模型组相比，ROS
通过转染 Ad⁃mCherry⁃GFP⁃LC3B 观察 H9C2 细 水平升高，而细胞凋亡率差异无统计学意义。以上
胞中自噬体与溶酶体融合的情况（图 9）。结果发 实验结果说明 Lig 可增加自噬体与溶酶体结合，促
现模型组中自噬溶酶体的形成较对照组显著降 进受损线粒体的降解回收，减少 ROS 的释放，保护
低，给予 Lig 或 Lig+自噬激动剂 Rapa 后，自噬溶酶 线粒体膜电位，从而减少细胞凋亡。
体的形成均较模型组增加，而给予 Lig+自噬抑制
3 讨 论
剂 3⁃MA 组的自噬溶酶体形成则与模型组无显著
差异。 本研究使用大鼠心脏左冠状动脉前降支结扎