Page 8 - 南京医科大学学报自然科学版

第43卷第10期
·1334 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2023年10月

genes of mature adipocytes were detected by qRT⁃PCR. Results：Compared with MSR1 +/+ mice，the expression of thermogenic genes in
adipose tissue of MSR1 -/- mice was significantly decreased. Further，the number of M2 macrophages in scWAT of MSR1 -/- mice
-/-
decreased significantly. After fed with HFD for 12 weeks，MSR1 mice had significantly higher weight，lower O2 consumption and heat
production. The thermogenic capacity of adipose tissue in MSR1 -/- HFD mice was significantly reduced compared with MSR1 +/+ HFD
mice after cold exposure. In vitro cell studies，compared with the mature adipocytes induced by peritoneal macrophage conditioned
+/+
medium in MSR1 mice，the expression of thermogenic genes in mature adipocytes induced by peritoneal macrophage conditioned
medium in MSR1 -/- mice was significantly reduced. Conclusion：After cold exposure，MSR1 increases the thermogenic capacity of
adipose tissue by promoting the polarization of M2 macrophages.
［Key words］ macrophage scavenger receptor 1；cold exposure；adipose thermogenesis；macrophage M2 polarization
［J Nanjing Med Univ，2023，43（10）：1333⁃1341］

心血管疾病发病率和死亡率在世界范围内仍 购自美国 Jackson 动物研究中心。C57BL/6 小鼠购
在逐年上升。肥胖、高血压和糖尿病等多种危险因 自江苏省医药动物实验中心。
素都与心血管疾病发生相关 。其中，肥胖可归因 UCP1抗体（Abcam公司，英国）；牛血清白蛋白、
［1］
于能量摄入与消耗失衡，表现为过多脂质在脂肪组 HEPES 酸（Biosharp 公司，美国）；BCA Protein Assay
织的异常积聚，并伴随有大量免疫细胞浸润。肥胖 Reagent Kit（Pierce 公司，美国）；Electrochemi Lumi⁃
可导致2型糖尿病、高血压、脑卒中和多种类型癌症 nescence（ECL）（Amersham Biosciences 公司，美国）；
（胃癌、肝癌、胆囊癌、卵巢癌等）的发生 。与主要 免疫组化ABC染色试剂盒（Santa Cruz Biotechnology
［2］
负责能量存储的白色脂肪细胞不同，棕色脂肪细胞 公司，美国）；RNA 提取试剂（TaKaRa 公司，日本）；
由于富含有大量的线粒体，具备较强的产热能力 。 实 时 荧 光 定 量 PCR（real ⁃ time quantitative PCR，
［3］
近年的研究表明，白色脂肪细胞在特殊条件刺激下 qRT⁃PCR）试剂盒（Roche公司，美国）；各种 qRT⁃PCR
可以转化为具有产热能力的米色脂肪细胞 。米色 引物序列由美国Invitrogen公司合成。
［4］
脂肪细胞可能成为治疗糖尿病、慢性炎症和肥胖等 1.2 方法
代谢紊乱疾病的新型靶细胞 。 1.2.1 实验动物模型及分组
［5］
A1 类清道夫受体（macrophage scavenger recep⁃ 选取 8 周龄正常饮食（common diet，CD）的雄性
tor 1，MSR1）是一类巨噬细胞表面的模式识别受体， MSR1 小鼠作为野生型对照组，MSR1 小鼠作为敲
+/+
-/-
可以介导巨噬细胞多种功能，包括脂质摄取、细胞 除型实验组，分别将两种小鼠置于室温（25 ℃）或低
凋亡、细胞趋化和极化分型等 。MSR1在动脉粥样 温条件（6 ℃）下持续刺激1 d或者14 d，或给予两种
［6］
硬化、心肌梗死和肥胖诱导的高血压等心血管疾病 小鼠连续 12 周的高脂饮食（high fat diet，HFD）后置
发生发展中发挥重要保护作用。已有研究表明，慢性 于室温或低温条件下持续刺激 7 d（HFD 喂养的肥
低温刺激诱导下，皮下白色脂肪组织（subcutaneous 胖小鼠因代谢紊乱，冷刺激 14 d 后整体状态不佳，
white adipose tissue，scWAT）中的 M2 型巨噬细胞大 故采用冷刺激 7 d 方案）。正常饮食实验模型分为
量积聚，并促进脂肪细胞的活化和产热 ［7-8］ 。本课题 4 组：MSR1 +/+ 25 ℃组、MSR1 25 ℃组、MSR1 +/+ 6 ℃
-/-
组前期研究发现，MSR1 可以促进肥胖小鼠附睾脂 组、MSR1 -/- 6 ℃组；高脂饮食实验模型分为 4 组：
肪组织中巨噬细胞的 M2 型分化，发挥拮抗炎症的 MSR1 +/+ HFD 25 ℃组、MSR1 HFD 25 ℃组、MSR 1+/+
-/-
作用，提示 MSR1 也可能调控脂肪细胞的产热能 HFD 6 ℃组、MSR1 HFD 6 ℃组。所有实验操作均
-/-
力。因此，本研究拟探讨 MSR1 在低温刺激诱导脂 获得南京医科大学动物伦理委员会批准（IACUC⁃
肪产热进程中的作用及其机制，寻找新的肥胖相关 2009003）。
-/-
性疾病干预靶点。 1.2.2 MSR1 小鼠基因型鉴定
提取 MSR1 小鼠鼠尾 DNA，设定 PCR 反应体
-/-
1 材料和方法
系扩增产物，配制 3%琼脂糖凝胶，待胶凝固后上
1.1 材料 样，插上电极，DNA 由负极向正极电泳，电压为
C57BL/6 背景的 MSR1 基因敲除小鼠（MSR1 ） 200 V。当条带电泳至胶 2/3 处时，观察 DNA 成像，
-/-