Page 70 - 南京医科大学学报自然科学版

第43卷第8期
·1104 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2023年8月

止与活动的时间（s）。评价指标：活动时间/（活动时 量资料采用均数±标准差（x ± s）表示，多组间比
［9］
间+静止时间） 。 较采用单因素方差分析（one⁃way ANOVA），组间
1.2.4 灌注取材 多重比较采用 SNK⁃q 检验，P＜0.05 为差异有统计
对小鼠腹腔注射1%戊巴比妥钠溶液（0.008 mg/g） 学意义。
进行麻醉后，将小鼠沿腹中线剪开，暴露胸腔心
2 结 果
脏。将灌注用针头自左心室下角插入后，剪开右心
耳，通过针头先注入 20 mL 0.9% NaCl，可见小鼠肝 2.1 RU486对中缝背核区域内GC受体的影响

脏颜色变化。待右心耳流出清澈液体后，注入20 mL 从IF染色实验结果中发现，模型组小鼠中缝背
4%多聚甲醛（paraformaldehyde，PFA）。灌注完毕 核区域内 GC 受体荧光面积占比增加，显著高于对
后，用剪刀分离小鼠头部，从后向前剥离颅骨取出 照组小鼠［（1.084±0.386）％ vs.（0.291±0.130）％，

鼠脑。将取出的鼠脑放入 4% PFA 中固定。24 h P＜0.05］；与溶媒组相比，经 RU486 药物处理后，小
后，换成 20%蔗糖溶液继续固定。待鼠脑沉底 鼠中缝背核区域内 GC 受体荧光面积占比明显降
后，更换为 25%蔗糖溶液继续固定。鼠脑再次沉 低［（1.273±0.431）% vs.（0.623±0.299）%，P＜0.05，

底后，更换为 30%蔗糖溶液固定。待鼠脑于 30% 图 1］。
蔗糖溶液中沉底，表明沉糖完毕，鼠脑中水分已 对照组 模型组
经充分排出。
1.2.5 免疫荧光（immunofluorescence，IF）染色
将冰冻玻片从冰箱取出，放入37 ℃温箱内复温
30 min 后，取出于 PBS 清洗（0.01 mol/L，3 min×3
次），滤纸吸干多余水分后用组化笔圈画组织。将
0.3 % Triton X⁃100 溶液和 10 %驴血清加入 PBS 中
溶媒组 RU486组
稀释后滴加于玻片上，室温封闭1 h。封闭完成后用
PBS 清洗（0.01 mol/L，3 min×3 次），滤纸吸干多余水
分后滴加一抗，包括小鼠抗 GC 受体抗体（1∶400，
上海 Absin 公司）、兔抗 IBA1 抗体（1∶100，Novus
Biologicals 公司，美国）和大鼠抗 CD11b 抗体（1∶
100；Thermo Fisher Scientific 公司，美国）加PBS稀释
后滴加与玻片上，4 ℃ 过夜。一抗孵育完成后取出， 2.0
* *
用 PBS 清洗（0.01 mol/L，3 min×3 次）后滴加二抗室 *
（ % ）
温孵育 2 h，清洗后 DAPI 复染 10 min，PBS 清洗后封 1.5
片镜下观察，观察使用研究级倒置荧光显微镜
（BX53/DP73，Olympus公司，日本）。 荧光面积占比 1.0
1.2.6 药物处理 0.5
将 应 激 后 小 鼠 随 机 分 为 RU486 组 和 溶 媒
组，RU486 组腹腔注射糖皮质激素受体抑制剂 0
对照组 模型组 溶媒组 RU486组
（1 mg/100 g，每天 4 次，Mifepristone⁃84371⁃65⁃3，上 两组比较，P＜0.05。
*
海Absin公司），将RU486按适当浓度溶解于无水乙 图 1 RU486 对中缝背核区域内 GC 受体数量的影响（IF，×
醇溶液中，充分溶解后加入无菌生理盐水稀释，稀 10，左下角×20）
释完成后通过腹腔注射给药。溶媒组腹腔注射乙 Figure l The count of GC receptor changes in dorsal ra⁃
醇盐溶液（1 mg/100 g，每天 4 次） ，乙醇盐溶液是 phe nucleus area before and after stressedor⁃
［11］
将无水乙醇，按同样比例加入无菌生理盐水后稀释 RU486 injection（IF，×10 or ×20）
而成，通过腹腔注射给药。 2.2 RU486对中缝背核区域内小胶质细胞的影响

1.3 统计学方法 从 IF 染色实验结果中发现，与对照组相比，模
应用 SPSS 26.0 统计学软件进行统计分析，计 型组小鼠中缝背核区域内小胶质细胞荧光面积占