Page 70 - 南京医科大学学报自然科学版
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第43卷第8期
               ·1104 ·                           南 京    医 科 大 学 学         报                        2023年8月


              止与活动的时间(s)。评价指标:活动时间/(活动时                         量资料采用均数±标准差(x ± s)表示,多组间比
                          [9]
              间+静止时间) 。                                         较采用单因素方差分析(one⁃way ANOVA),组间
              1.2.4 灌注取材                                        多重比较采用 SNK⁃q 检验,P<0.05 为差异有统计
                  对小鼠腹腔注射1%戊巴比妥钠溶液(0.008 mg/g)                  学意义。
              进行麻醉后,将小鼠沿腹中线剪开,暴露胸腔心
                                                                2  结 果
              脏。将灌注用针头自左心室下角插入后,剪开右心
              耳,通过针头先注入 20 mL 0.9% NaCl,可见小鼠肝                   2.1  RU486对中缝背核区域内GC受体的影响

              脏颜色变化。待右心耳流出清澈液体后,注入20 mL                              从IF染色实验结果中发现,模型组小鼠中缝背
              4%多聚甲醛(paraformaldehyde,PFA)。灌注完毕                 核区域内 GC 受体荧光面积占比增加,显著高于对
              后,用剪刀分离小鼠头部,从后向前剥离颅骨取出                            照组小鼠[(1.084±0.386)% vs.(0.291±0.130)%,

              鼠脑。将取出的鼠脑放入 4% PFA 中固定。24 h                       P<0.05];与溶媒组相比,经 RU486 药物处理后,小
              后,换成 20%蔗糖溶液继续固定。待鼠脑沉底                            鼠中缝背核区域内 GC 受体荧光面积占比明显降
              后,更换为 25%蔗糖溶液继续固定。鼠脑再次沉                           低[(1.273±0.431)% vs.(0.623±0.299)%,P<0.05,

              底后,更换为 30%蔗糖溶液固定。待鼠脑于 30%                         图 1]。
              蔗糖溶液中沉底,表明沉糖完毕,鼠脑中水分已                                      对照组                     模型组
              经充分排出。
              1.2.5 免疫荧光(immunofluorescence,IF)染色
                  将冰冻玻片从冰箱取出,放入37 ℃温箱内复温
              30 min 后,取出于 PBS 清洗(0.01 mol/L,3 min×3
              次),滤纸吸干多余水分后用组化笔圈画组织。将
              0.3 % Triton X⁃100 溶液和 10 %驴血清加入 PBS 中
                                                                         溶媒组                    RU486组
              稀释后滴加于玻片上,室温封闭1 h。封闭完成后用
              PBS 清洗(0.01 mol/L,3 min×3 次),滤纸吸干多余水
              分后滴加一抗,包括小鼠抗 GC 受体抗体(1∶400,
              上海 Absin 公司)、兔抗 IBA1 抗体(1∶100,Novus
              Biologicals 公司,美国)和大鼠抗 CD11b 抗体(1∶
              100;Thermo Fisher Scientific 公司,美国)加PBS稀释
              后滴加与玻片上,4 ℃ 过夜。一抗孵育完成后取出,                                   2.0
                                                                                      *        *
              用 PBS 清洗(0.01 mol/L,3 min×3 次)后滴加二抗室                                  *
                                                                         ( % )
              温孵育 2 h,清洗后 DAPI 复染 10 min,PBS 清洗后封                         1.5
              片镜下观察,观察使用研究级倒置荧光显微镜
             (BX53/DP73,Olympus公司,日本)。                                   荧光面积占比  1.0
              1.2.6 药物处理                                                  0.5
                  将 应 激 后 小 鼠 随 机 分 为 RU486 组 和 溶 媒
              组,RU486 组腹腔注射糖皮质激素受体抑制剂                                      0
                                                                               对照组 模型组 溶媒组 RU486组
             (1 mg/100 g,每天 4 次,Mifepristone⁃84371⁃65⁃3,上                        两组比较,P<0.05。
                                                                                       *
              海Absin公司),将RU486按适当浓度溶解于无水乙                       图 1  RU486 对中缝背核区域内 GC 受体数量的影响(IF,×
              醇溶液中,充分溶解后加入无菌生理盐水稀释,稀                                 10,左下角×20)
              释完成后通过腹腔注射给药。溶媒组腹腔注射乙                             Figure l  The count of GC receptor changes in dorsal ra⁃
              醇盐溶液(1 mg/100 g,每天 4 次) ,乙醇盐溶液是                            phe nucleus area before and after stressedor⁃
                                           [11]
              将无水乙醇,按同样比例加入无菌生理盐水后稀释                                     RU486 injection(IF,×10 or ×20)
              而成,通过腹腔注射给药。                                      2.2 RU486对中缝背核区域内小胶质细胞的影响

              1.3  统计学方法                                             从 IF 染色实验结果中发现,与对照组相比,模
                  应用 SPSS 26.0 统计学软件进行统计分析,计                    型组小鼠中缝背核区域内小胶质细胞荧光面积占
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