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第44卷第3期 秦立昊，李静燕，张嘉伟，等. 生物3D打印丹酚酸B⁃海藻酸钠⁃明胶皮肤支架促进糖尿病大鼠
2024年3月 创面愈合［J］. 南京医科大学学报（自然科学版），2024，44（3）：297-304，328 ·299 ·

中，置于 40 ℃水浴中搅拌 30 min；按 SAB 占海藻酸 空白对照组创面不采取任何处理，仅用无菌纱布包
钠与明胶总重的百分比制成 0%、0.5%、1.0%、1.5% 扎，凡士林纱布组采用凡士林纱布覆盖创面，其余各
的生物墨水。 组以含不同比例SAB的皮肤支架覆盖创面。于第7、
使用 RegenHU 3D 打印机，将以上制备的生物 14天观察创面愈合、渗出等情况，并拍照记录，判断创
墨水加入热熔挤压式针筒中，加热至40 ℃并保持恒 面恢复情况。
温，气压0.25 MPa，针尖距离接收板1 mm，打印速度 1.2.5 组织学检查及氧化应激水平检测
5 mm/s，针头 25 G，按照 1.2 cm×1.2 cm 打印 4 层，间 第 7、14 天时，分别随机处死 3 只大鼠，获取组
距0.8 mm，最终制备出SAB含量为0%、0.5%、1.0%、 织标本，包括创面及创面周围组织。采用ROS荧光
1.5%的SAB⁃海藻酸钠⁃明胶皮肤支架。扫描电镜观 染色，抗氧化酶 SOD、GSH⁃PX、CAT 及氧化应激产
察支架形貌 。 物 MDA 检测评估创面氧化应激水平；HE 染色观察
1.2.2 皮肤支架的药物释放 创面修复情况及肉芽组织的生长情况；Masson染色

将含有不同含量 SAB 的皮肤支架浸泡在 37 ℃ 观察创面胶原蛋白沉积情况。
5 mL 的磷酸盐缓冲液（PBS）中，100 r/min 间断振 1.3 统计学方法
荡。在多个时间点（0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、10.0、12.0、 采用 GraphPad Prism 8.0 软件进行数据分析及
24.0、48.0、72.0 h）收集混合溶液，采用高效液相色谱 作图。符合正态分布的数据采用均数±标准差（x ± s）
法对 SAB 进行定量分析。根据上海麦克林公司的 表示。两样本均数比较采用独立样本t检验，多组样
SAB标准参考品（99.0%）计算SAB的累积释放量。 本均数比较采用单因素方差分析（one⁃way ANOVA），
1.2.3 糖尿病大鼠模型的构建 各组之间的两两比较采用 SNK 法，P＜0.05 为差异
SPF 级雄性 SD 大鼠，8 周龄，体重约 150 g。高 有统计学意义。
糖高脂饲料诱导喂养4周，一次性腹腔注射1%链脲
2 结 果
佐菌素 30 mg/kg（0.1 mol/L 柠檬酸缓冲液配制，pH
4.5）。用药72 h后，自大鼠尾缘静脉微量采血检测随 2.1 皮肤支架的形貌
机血糖，若血糖值>16.7 mmol /L，则视为 2 型糖尿病 肉眼观：4 个不同含量 SAB 组的皮肤支架均呈
大鼠造模成功。 网格状，孔径均匀（图1A）；扫描电镜：4个不同含量
1.2.4 动物分组及干预 SAB 组皮肤支架均为多孔网状立体结构，孔隙均匀
36只2 型糖尿病大鼠随机分为6组（每组6只）： （图1B）。
空白对照组、凡士林纱布组以及皮肤支架组（0%SAB、 2.2 皮肤支架的体外药物释放
0.5%SAB、1.0%SAB、1.5%SAB组）。大鼠采用 1%戊 各组 SAB 累积释放量均随释放时间延长逐渐
巴比妥钠麻醉，备皮，使用无菌手术刀在大鼠背部 增加，其中 1.5%SAB 组皮肤支架在各个时间点的
皮肤上切出边长为 0.8 cm 的正方形，深度达肌层。 SAB释放量均高于其他3组（图2）。

A 0% SAB 0.5% SAB 1.0% SAB 1.5% SAB
0% SAB 0.5% SAB 1.0% SAB 1.5% SAB B

×50

×300

A：Macroscopic morphology of SAB⁃sodium alginate⁃gelatin skin scaffolds with different specifications. B：Microscopic morphology of SAB⁃sodium
alginate⁃gelatin skin scaffolds with different specifications under scanning electron micrograph.
图1 不同规格的SAB⁃海藻酸钠⁃明胶皮肤支架的宏观形貌及微观形貌
Figure 1 Macroscopic and microscopic morphology of SAB⁃sodium alginate⁃gelatin skin scaffolds with different specifica⁃
tions