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第41卷第12期 何庆玲，赵晨卉，王伟民，等. C5a激活Akt1⁃ERK1/2通路促进NSCLC细胞的增殖和迁移［J］.
2021年12月 南京医科大学学报（自然科学版），2021，41（12）：1721-1727 ·1725 ·

和 ERK1/2 抑制剂 U0126 分别处理 PC9 细胞 30 min PC9 细胞后 Akt1 和 ERK1/2 的活化可能存在一定的
（设 DMSO 溶剂对照），接着用 C5a 刺激 3 h 后，行 上下游关系，即 C5a 刺激 PC9 细胞后通过激活 Akt1
Western blot 检测 Akt1 和 ERK1/2 的表达和磷酸化。 诱导 ERK1/2 的活化。CCK⁃8 和细胞划痕实验进一
结果显示，Perifosine 和 U0126 可分别阻断 Akt1 和 步表明，抑制 Akt1 和 ERK1/2 可以显著减弱 C5a 上
ERK1/2 的磷酸化，且均不影响其蛋白表达。此外， 调的 PC9 细胞增殖和迁移（图 6）。上述结果表明，
Perifosine 能 下 调 ERK1/2 的 磷 酸 化 ，而 U0126 对 C5a 刺激 PC9 细胞后可通过激活 Akt1⁃ERK1/2 通路
Akt1 的磷酸化没有明显影响（图 5），提示 C5a 刺激 促进PC9细胞的增殖和迁移。

A B
- + + + C5a p⁃Akt1
5
- + - - DMSO p⁃ERK1/2
- - + - Perifosine 4
蛋白相对表达量
- - - + U0126
—60 kDa 3
p⁃Akt1
t⁃Akt1 —60 kDa 2
p⁃ERK1/2 —42，44 kDa 1 * * *
t⁃ERK1/2 —42，44 kDa 0
Perifosine+C5a
DMSO DMSO+C5a U0126+C5a
β⁃actin
—42 kDa
A：Western blot 电泳条带；B：半定量分析柱形图（与DMSO+C5a组比较，P < 0.01，n=3）。
*
图5 Akt1和ERK1/2抑制剂对C5a诱导PC9细胞中Akt1和ERK1/2表达和磷酸化的影响
Figure 5 Effects of Akt1 and ERK1/2 inhibitors on the expression and phosphorylation of Akt1 and ERK1/2 in PC9 cells in⁃
duced by C5a

A B
0 h 24 h 48 h
2.0
nm ） 1.5 * * DMSO
（ 450 D 1.0

0.5
0
DMSO DMSO+C5a U0126+C5a
Perifosine+C5a
DMSO+C5a

C
100
（ % ） 80
细胞迁移率 40 * * Perifosine+C5a
60

20
0
Perifosine+C5a
DMSO DMSO+C5a U0126+C5a
U0126+C5a

A：CCK⁃8实验；B：细胞划痕代表图片（×40）；C：划痕实验的半定量分析柱形图。与 DMSO+C5a组比较，P < 0.01（n=3）。
*
图6 Akt1和ERK1/2抑制剂对C5a诱导PC9细胞增殖和迁移的影响
Figure 6 Effects of Akt1 and ERK1/2 inhibitors on the proliferation and migration of PC9 cells induced by C5a