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第42卷第10期              郑 湘，吴周全，符国伟，等. 大黄素对CFA诱导小鼠炎性痛的作用及机制［J］.
                 2022年10月                  南京医科大学学报（自然科学版），2022，42（10）：1364-1370，1401                   ·1365 ·


                    疼痛是日常生活和临床中最常见的疾病之一，                          vanillic acid 4，TRPV4）、GAPDH 一抗和羊抗兔二抗
                其中炎性疼痛最为常见 。炎性疼痛与炎症发生的                           （Abcam 公司，美国）；Nanodrop 2000 分光光度仪
                                     ［1］
                区域紧密相关，这些炎症发生部位中的伤害感受器                           （Thermo Fisher Scientific公司，美国）。
               ［位于三叉神经和背根神经节（dorsal root ganglion，                1.2  方法
                DRG）中］通常在检测到外界有害的化学、热和机械                          1.2.1  动物处理
                                                        ［2］
                刺激后，将相关信息传递至大脑并产生痛觉 。在                                所有动物实验经南京医科大学附属常州第二
                炎症发生部位，机体通常对有害刺激的反应增强                             人民医院动物保护福利委员会批准。选取 8 周龄，
               （痛觉过敏）或在正常无害刺激的条件下（痛觉异                             体重（25±1）g 健康雄性 C57BL/6 小鼠进行疼痛行为
                常）触发疼痛 。炎症如不及时治愈，炎性疼痛就会                           学试验以及炎性疼痛小鼠模型制作。将小鼠饲养
                           ［3］
                逐渐发展成为慢性疼痛，即使后期导致炎症的伤                             在温度（25±1）℃可控的微型小鼠笼中，湿度保持在
                害得到干预，疼痛依然长时间持续存在 。众所                            （55±5）%，光照时间维持 12 h 光照/12 h 黑暗周期，
                                                     ［4］
                周知，炎性疼痛将严重影响患者的生活质量和劳                             并给予充足的食物和无菌蒸馏水供其自由采食。
                动能力，由炎性疼痛发展成为慢性疼痛无疑给患                                 在炎性疼痛小鼠模型制作前1天，将12只小鼠
                者的家庭和社会带来巨大的经济负担                     ［5］ 。据报      分为 Sham 组和炎性疼痛模型组两组，每组 6 只，并
                道，机械损伤和高温等物理因素以及神经系统中                             测定小鼠基础伤害感受性阈值。炎性疼痛模型制
                的化学物质或炎性介质可引起炎性疼痛，但引起                             作如Xiang等   ［14］ 报道，将25 μL CFA通过皮下注射于
                                            ［6］
                疼痛的确切机制目前尚未明确 。同时，限于目前                            小鼠右后爪足背侧表面诱发炎性疼痛模型，Sham组
                的研究基础和治疗水平，炎性疼痛的临床治疗仍是                            则向小鼠右后爪足背侧表面注射等体积无菌生理
                            ［7］
                一个重要问题 。                                          盐水。在注射 CFA 后的 7 d 内，每隔 1 d 评估 1 次小
                    大黄素（1，3，8⁃三羟基⁃6⁃甲基蒽醌，emodin）是                 鼠的机械痛敏和热痛敏行为。
                天然的蒽醌衍生物，是大黄和茜草科、鼠李科和豆                                大黄素用 DMSO 溶解后，腹腔注射时用生理盐
                科等多种药用中草药的主要成分 。研究表明，大                            水稀释到工作浓度。将36只小鼠随机分为6组，每
                                              ［8］
                黄素具有多种生物学特性，如抗病毒、抗菌、抗炎、                           组6只，前5组在小鼠足背侧注射CFA 4 d后分别将
                免疫抑制和诱导凋亡等           ［9-12］ 。更重要的是，在大量            不同剂量的大黄素液（0、5、25、50、100 mg/kg）通过
                的中医临床实践中，大黄常被用于治疗便秘或疼痛                            腹腔注射给药。空白组则于小鼠足背侧表面和腹
                相关疾病 。为明确大黄素在炎性疼痛中的作用，本                           腔注射等体积无菌生理盐水。
                        ［13］
                研究利用弗氏完全佐剂（complete Freund’s adjuvant，                在确定最适镇痛效果的大黄素溶液剂量后，将
                CFA）诱发的炎性疼痛小鼠模型，评估大黄素对CFA                         24只小鼠分为4组，每组6只，CFA组和CFA+Emodin
                诱发的炎性疼痛小鼠模型的镇痛作用，并进一步阐                            组注射 CFA 制作炎性疼痛模型，另外 Sham 组和
                明其镇痛的可能分子机制。                                      Sham+Emodin组则注射等体积生理盐水。在CFA注
                                                                  射后第4天，分别给CFA+Emodin组和Sham+Emodin
                1 材料和方法
                                                                  组小鼠腹腔注射最适镇痛效果的大黄素，同时以等
                1.1  材料                                           体积的生理盐水分别对CFA 组和Sham 组小鼠进行
                    C57BL/6 小鼠购自赛业模式生物研究中心（太                      腹腔注射。在大黄素腹腔注射 0.5、2、4、8、12、24、
                仓）有限公司［许可证号：SCXK（苏）2018⁃0003］。                    48 h后分别评估小鼠的机械疼痛阈值和热痛阈值。
                CFA（Sigma 公司，美国）；大黄素（Sigma⁃Aldrich 公              1.2.2  疼痛行为学试验

                司，美国）；TRIzol试剂（Invitrogen公司，美国）；Prim⁃             1.2.2.1  机械性异常性疼痛测试
                erScript MT  RT Master Mix 试 剂 盒 、SYBR ®  Premix      使用冯·弗雷（von Frey）尼龙丝测量小鼠机械疼
                Ex Taq 试剂盒（TaKaRa 公司，日本）；肿瘤坏死                     痛敏感性，以评估小鼠对连续增加的尼龙丝张力作
                      TM
                因子α（tumor necrosis factor α，TNF⁃α）、白细胞介素          出的缩爪反应。具体操作如下，将小鼠放置在底部

               （interleukin，IL）⁃1β和 IL⁃6 免疫测定试剂盒（R＆D              带有金属丝网的塑料笼中，让每只小鼠在测试前适
                Systems公司，美国）；兔抗小鼠瞬时受体电位香草酸1                      应 15~30 min。在每只小鼠右后脚掌底部的中间区
               （transient receptor potential vanillic acid 1，TRPV1）、  域使用von Frey尼龙丝，刺激力起始量为0.008 g，范

                瞬时受体电位香草酸 4（transient receptor potential          围为0.008~2.000 g，细丝接触后爪直至弯曲，而细丝
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