Page 53 - 南京医科大学学报自然科学版

第42卷第6期 钱徐萍，张学会，孙鲁宁，等. 兰索拉唑诱导心肌细胞氧化应激损伤的机制研究［J］.
2022年6月 南京医科大学学报（自然科学版），2022，42（06）：802-808 ·805 ·

的表达，且在给药24 h时蛋白表达与0 h比较，差异 作用。与 Con 组相比，LPZ 组内质网应激诱导的凋
有统计学意义（图3），说明LPZ引发H9C2细胞内质 亡相关蛋白Cleaved⁃Caspase⁃12、Cleaved⁃Caspase⁃3、
网应激后触发凋亡。Bax凋亡蛋白表达呈时间依赖 Cyt C 和 Bax/Bcl⁃2 表达增强，而 NAC 组和 NAC+LPZ
性增加，Bcl⁃2 抗凋亡蛋白表达呈时间依赖性降低， 组蛋白表达无显著变化（图 6），说明 NAC 对 LPZ 诱
Cyt C蛋白表达呈时间依赖性增加，进一步说明LPZ 导的凋亡有显著抑制作用。
时间依赖性地诱导细胞凋亡。
3 讨 论
2.3 ROS抑制剂能缓解LPZ诱导的心肌损伤
为了进一步验证氧化应激在LPZ诱导的内质网 LPZ 是苯并咪唑类化合物，口服后在酸性条件
应激和细胞凋亡中的作用，本研究使用ROS抑制剂 下转化为活性代谢物发挥药理活性，抑制胃酸分泌
NAC（1 mmol/L）单独或联合LPZ共同孵育细胞48 h， 的最后一步。由于临床使用量逐年增加，潜在的不
并用 ROS 检测试剂盒和 Western blot 检测 ROS 和蛋 良反应逐渐引起研究者的关注。LPZ在心脏方面的
白表达水平的变化。与 Con 组相比，LPZ 组 ROS 荧 潜在作用存在争议。Patil 等 ［11］ 在大鼠体内的研究
光强度增强，而 NAC 组和 NAC+LPZ 组荧光强度无 表明，多次服用 LPZ 和奥美拉唑可以通过降低氧化
显著变化（图 4），说明 NAC 对 LPZ 诱导的 ROS 荧光 应激和促炎性细胞因子，降低异丙肾上腺素诱发的
增强有显著抑制作用。与 Con 组相比，LPZ 组内质 心肌梗死。然而，Sehested 等 ［12］ 的观察性研究结果
网应激蛋白GRP78和CHOP表达增强，而NAC组和 表明，大剂量 PPI 长期使用会诱发缺血性卒中和心
NAC+LPZ 组内质网应激蛋白表达无显著变化（图 肌梗死，6个月内发生缺血性卒中的风险增加29%，
5），说明NAC对LPZ诱导的内质网应激有显著抑制 发生心肌梗死的风险增加 36%。在一项随机双盲

A B C
0 h 12 h 24 h 48 h 1.5 * 1.5 *
*
GRP78 78 kDa
GRP78/β⁃actin CHOP/β⁃actin
CHOP 27 kDa 1.0 1.0
β⁃actin 42 kDa 0.5 0.5

0 0
0 h 12 h 24 h 48 h 0 h 12 h 24 h 48 h
A：Western blot检测各组内质网应激蛋白表达；B：各组GRP78蛋白表达量的比较；C：各组CHOP蛋白表达量的比较。两组比较，P < 0.05，n=3。
*
图2 LPZ对H9C2细胞内质网应激蛋白表达的影响
Figure 2 The effects of LPZ on expression of endoplasmic reticulum stress protein in H9C2 cells

A B
0 h 12 h 24 h 48 h 2.0 *
Cleaved⁃Caspase⁃12 42 kDa *
Cleaved⁃Caspase⁃3 19 kDa 1.5
Cyt C 12 kDa Cleaved⁃Caspase⁃12/ GAPDH 1.0
Bax 21 kDa 0.5
Bcl⁃2 26 kDa
0
GAPDH 36 kDa
0 h 12 h 24 h 48 h
C ** D E **
2.0 * * 2.0 * * 3 * ***
Cleaved⁃Caspase⁃3/ GAPDH 1.5 Cyt C/GAPDH 1.5 Bax/Bcl⁃2/GAPDH 2 1

1.0
1.0
0.5
0.5
0 0 0
0 h 12 h 24 h 48 h 0 h 12 h 24 h 48 h 0 h 12 h 24 h 48 h
A：Western blot检测各组凋亡相关蛋白表达；B：各组Cleaved⁃Caspase⁃12蛋白表达量的比较；C：各组Cleaved⁃Caspase⁃3蛋白表达量的比较；
D：各组Cyt C蛋白表达量的比较；E：各组Bax/Bcl⁃2蛋白表达量的比较。两组比较，P < 0.05，P < 0.01， P < 0.001，n=3。
***
**
*
图3 LPZ对H9C2细胞凋亡相关蛋白表达的影响
Figure 3 The effects of LPZ on expression of apoptosis related proteins in H9C2 cells