Page 52 - 南京医科大学自然版

第45卷第12期
·1734 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2025年12月

表4 经葡聚糖凝胶LH⁃20分离后不同收集管中5⁃HMF峰面积、比例及含量（n=3）
Table 4 Peak area，proportion and content of 5⁃HMF in different fractions after sephadex LH⁃20 separation（n=3）

6
6
Tube Peak area（×10 ，x ± s） Peak area 95% CI（×10 ） Proportion（%，x ± s） Content（μg，x ± s）
T8 02.47 ± 1.99 -3.57-8.52 00.77 ± 0.57 013.44 ± 10.35
T9 25.28 ± 7.74 1.73-48.83 08.25 ± 1.73 158.34 ± 46.91
T10 49.95 ± 6.95 28.81-71.09 16.55 ± 0.85 315.08 ± 41.86
T11 68.25 ± 5.72 50.82-85.68 22.74 ± 1.24 431.32 ± 34.08
T12 72.37 ± 4.47 58.75-85.97 24.18 ± 1.82 457.46 ± 26.15
T13 47.93 ± 1.09 44.63-51.23 16.10 ± 1.71 302.23 ± 4.640
T14 21.49 ± 3.44 11.00-31.98 07.11 ± 0.50 134.23 ± 19.60
T15 09.18 ± 0.78 6.79-11.56 03.05 ± 0.02 56.02 ± 2.70
T16 03.75 ± 0.19 3.18-4.32 01.25 ± 0.07 21.52 ± 1.09

表 5 3 包香烟 5⁃HMF 洗脱分布数据的双因素方差分析 提。考虑到5⁃HMF易溶于水相，而液液萃取则能利
结果 用目标物质在两种互不相溶溶剂中的溶解度差异进
Table 5 Two⁃way ANOVA results of 5⁃HMF elution data ［20-21］
行重新分配，并且液液萃取操作简单、快速 。因
among three cigarette packs
此，本研究选择两次液液萃取的方法粗提 CSE 中
Percentage of
Source of variation P 的 5⁃HMF，并发现两次液液萃取能够将 CSE 中
total variation（%）
92.18%的 5⁃HMF 高效转移至水相中。
Tube number 97.04 <0.000 1
由于经水相提取的色谱图在出峰时间7 min 之
Cigarette pack 01.37 0.007 2
后仍存在除5⁃HMF以外的显著杂质峰，表明液液萃
表6 Tukey’s多重比较结果（香烟包别） 取在提取5⁃HMF的同时，也将其他易溶于水相的化
Table 6 Tukey’s multiple comparisons test（cigarette 合物一并提取出来。因此，为提高分离纯度，有必
packs） 要对水相提取部分进行进一步的纯化处理。葡聚
Comparison groups Mean difference 95% CI P 糖凝胶 LH⁃20 是一种常用的凝胶过滤层析介质，由
A vs. B 43.57 10.72-76.42 <0.01 交联葡聚糖经羟丙基化修饰而成。它结合了分子
A vs. C 37.15 4.300-70.00 <0.05
筛分离和吸附层析的特性，适用于分离和纯化多种
B vs. C -6.42 -39.27-26.43 >0.05
有机化合物，尤其是黄酮类、生物碱、萜类等天然产
A，B，and C represent different cigarette packs.
物、多肽、小分子药物等 ［22-24］ 。其适用范围广，兼容
香烟经本体系分离获得的 5⁃HMF 含量为（1.80± 多种溶剂，分离效果好，分辨率高，操作简单，可重
0.17）mg，提取率达 89.55%，展现出良好的分离效 复使用。尼古丁是香烟中的传统组分，在香烟中的
率。统计分析进一步证实，虽然可能因为前期制 含量并不低且易溶于水 ［25］ 。为检验提取及分离出
备CSE及进行液液萃取过程中出现的误差，导致3包 的 5⁃HMF 组分中是否存在尼古丁，对 3 批次分离出
香烟样本间存在微小差异（香烟包别因素显著但 的洗脱液进行了尼古丁检测。发现尼古丁主要富
贡献率低），但 5⁃HMF 的洗脱分布高度一致（管数 集于第19~20管，与5⁃HMF段无重叠，表明尼古丁并
因素极显著），说明本方法在不同香烟样本间具有 未对5⁃HMF的分离过程造成干扰。
较好的稳定性和可重复性。实验数据表明，该分 鉴于 5⁃HMF 在香烟烟雾中的高含量及经代谢
离方法不仅实现了对香烟中 5⁃HMF 的高效提取， 后的高毒性，为更好地评价 5⁃HMF 在香烟烟雾中
同时保证了分离过程的可重复性，为后续相关研 的毒性作用，本研究基于液液萃取结合葡聚糖凝
究提供了可靠的技术支持。 胶 LH⁃20，构建了 CSE 中 5⁃HMF 的批量分离制备方
前期研究发现，无论是 3R4F 标准参考香烟还 法，该方法在保证量、效率及稳定性的同时，排除了
是中国品牌香烟中的5⁃HMF含量大致相当，故采用 香烟中重要组分尼古丁的干扰，为后续系统性地评
南京某主流品牌香烟进行 5⁃HMF 的分离提取。因 价香烟烟雾中5⁃HMF的毒性提供了技术支持，满足
溶于三氯甲烷的 CSE 呈现浓稠、深褐色状态，组分 后续动物染毒实验的需要。此外，不同于中药和食
非常复杂 ［19］ ，故首先对 CSE 中的 5⁃HMF 进行粗 品，从香烟烟雾中分离组分更有挑战和意义，本研