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第45卷第12期       李   平，王   峰，李 渊. 冠心病相关长链非编码RNA uc004coz.1的生物学功能与序列分析［J］.
                 2025年12月                    南京医科大学学报（自然科学版），2025，45（12）：1738-1746                      ·1739 ·


                sequencing results showed that the terminal position of 3′⁃RACE was 16 417. Conclusion：Understanding the biological function of
                down⁃regulated lncRNA uc004coz.1 in the plasma of CAD patients and analyzing its gene sequence can provide a target for the study of
                the mechanism of CAD and provide a theoretical basis for further study of uc004coz.1.
               ［Key words］ coronary artery disease；long noncoding RNA；uc004coz.1；cell proliferation；cell migration；rapid⁃amplification of cDNAend
                                                                            ［J Nanjing Med Univ，2025，45（12）：1738⁃1746］





                    大量研究证明长链非编码 RNA（long non⁃cod⁃                 24 例对照组），年龄 40~85 岁。CAD 诊断标准为至
                ing RNA，lncRNA）在冠心病（coronary artery disease，      少一段主要冠状动脉的血管造影证据，包括左前降
                CAD）及其亚型中发挥重要作用，lncRNA 被认为是                       支、左旋支或右冠状动脉，狭窄程度>50%                 ［11］ 。排除
                新的功能调控分子，参与动脉粥样硬化、心肌梗                             有严重原发疾病、急性感染、外伤、心肌梗死、脑梗
                死、心力衰竭、心绞痛和冠状动脉慢性完全闭塞等                            死、癌症、酒精中毒和药物成瘾的患者。对照者来
                疾病的发生发展 。ANRIL、KCNQ1OT1和GAS5等                     自体检指标正常的人群。本研究中经南京医科大学
                              ［1］
                lncRNA 与CAD 及急性心肌梗死疾病可能有一定相                       附属苏州医院伦理委员会批准（编号：KL901125）。
                关性  ［2-3］ 。内皮细胞（endothelial cell，EC）功能受损          所有参与者或其家属均签署知情同意书。
                被认为是早期动脉粥样硬化的起始因素，lncRNA通                         1.2  方法
                过调节血管EC的增殖、凋亡和血管生成，抑制血管                           1.2.1 细胞培养和转染
                凋亡或修复血管 EC 损伤，影响动脉粥样硬化的发                              人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endo⁃
                生发展，在动脉粥样硬化的预防和治疗中发挥重要                            thelial cell，HUVEC）购自江苏康为世纪生物科技股
                作用 。当脂质代谢紊乱时，脂质积聚在动脉内壁                            份技术有限公司。培养液含有10%胎牛血清（Gibco
                    ［4］
                形成斑块，也影响斑块的稳定性，引起血管腔狭窄。                           公司，美国），100 U/mL 链霉素和 100 U/mL 青霉素，
                实验发现，lncRNA MALAT1作为miR⁃141⁃3p/200A⁃              培养环境为加湿的 37 ℃含 5% CO2的细胞培养箱。
                3p 的竞争性内源 RNA（competing endogenous RNA，           磷酸盐缓冲液（PBS，HyClone公司，美国）洗涤细胞，
                ceRNA），能够增加含卷曲螺旋结构域80（containing                  胰酶 Trypsin⁃EDTA Solution（Sigma 公司，美国）消化
                coiled helix domain 80，CCDC80）的表达，导致脂蛋            细胞。转染前 24 h，在 24 孔板或 6 孔板中以每孔约
                白脂肪酶（lipase lipoprotein，LPL）表达下调，从而加              50%的密度接种 HUVEC，用 100 nmol/L si⁃NC 及 si⁃
                速冠心病的发展       ［5-6］ 。其他具有类似调节脂质代谢                 uc004coz.1转染细胞。转染24 h后使用TRIzol（Am⁃
                作用的 lncRNA 还包括 lncRNA LSTR        ［7］ 和 lncRNA    bion 公司，美国）提取细胞 RNA 并反转录为 cDNA，
                DYNLRB2⁃2 。相反，Mexis的缺失改变了ATP结合                    进行 RT⁃qPCR 实验检测 uc004coz.1 表达水平，转染
                          ［8］
                盒转运蛋白 A1（ATP⁃binding cassette transporter 1，      48 h后收集细胞进行Western blot实验。siRNA序列
                ABCA1）的染色体结构，降低了细胞对胆固醇过载                          如下，si⁃uc004coz.1：5′⁃CCACTAGGATACCAACAAA⁃
                的敏感性，并加速了冠心病的进展 。                                 3′，siNC：5′⁃GGCTCTAGAAAAGCCTATGC⁃3′，由广
                                              ［9］
                    目前关于 uc004coz.1 的研究较少，已知与心脏                   州锐博生物科技有限公司合成。
                重 构 相 关 的 lncRNA uc004cos.4、uc004coz.1、           1.2.2  血浆收集、RNA分离和RT⁃qPCR
                uc004cov.4、uc011mfi.2、uc022bqw.1、uc022bqs.1、          采用EDTA真空抗凝采血管采集每位参与者的
                uc022bqu.1与冠心病相关临床参数有关             ［10］ 。本研究      血样（4~6 mL），1 600 g 离心 10 min 后收集血浆，去
                旨在初步探究 uc004coz.1 的生物学功能与序列信                      除碎片。用TRIzol从血浆中提取总RNA，用2 μL 5×
                息，分析 uc004coz.1 对 EC 增殖迁移水平的影响，以                  PrimeScript RT Master Mix（RR036A，TaKaRa 公司，
                                                                            TM
                期为后续CAD相关研究提供理论基础。                                日本）将500 ng RNA逆转录为cDNA，用无RNA酶的

                                                                                                         ®
                                                                  H2O调节反应体系至10 μL。采用TB Green Premix
                1 对象和方法
                                                                  Ex Taq Ⅱ（TaKaRa 公司，日本）进行荧光定量实时
                                                                        TM
                1.1  对象                                           聚合酶链反应（reverse transcription⁃polymerase chain
                    收集2022年1月—2024年1月来自南京医科大                      reaction，RT⁃qPCR）。以β⁃肌动蛋白（β⁃actin）为内
                学附属苏州医院的 55 例受试者（31 例 CAD 患者和                     参。采用 LightCycler 480 InstrumentⅡ实时荧光定
                                                                                     ®
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