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第45卷第12期 李 平，王 峰，李 渊. 冠心病相关长链非编码RNA uc004coz.1的生物学功能与序列分析［J］.
2025年12月 南京医科大学学报（自然科学版），2025，45（12）：1738-1746 ·1743 ·

2.5 uc004coz.1影响细胞周期 回收后进行TA克隆，挑取10个菌落进行菌液PCR，
细胞周期检测结果显示，uc004coz.1敲减后S期 琼脂糖凝胶电泳结果如图 7C 所示，挑取 3、5、7、10
和 G2 期细胞较对照组明显减少（P 均<0.01），停滞 号进行测序，测序结果：5′⁃CACATTACAGTCAAAT⁃
G0/G1 期细胞明显增多（P < 0.01，图 5），说明敲减 CCCTTCTCGTCCCCATGGATGACCCCCCTCAGATA⁃
uc004coz.1能够抑制细胞的增殖。 GGGGTCCCTTGACCACCATCCTCCGTGAAATCAA⁃
2.6 uc004coz.1影响细胞周期蛋白表达 TATCCCGCACAAGAGTGCTACTCTCCTCGCTCCGG⁃
Western blot 实验显示 uc004coz.1 敲减后 Cyclin GCCCATAACACTTGGGGGTAGCTAAAGTGAACTG⁃
D1、Cyclin E1 表 达 量 较 NC 组 明 显 下 调（P 均 < TATCCGACATCTGGTTCCTACTTCAGGGTCATAAA⁃
0.01），Cyclin B1表达没有明显变化（P=0.08）。说明 GCCTAAATAGCCCACACGTTCCCCTTAAATAAGAC⁃
uc004coz.1 能够影响细胞周期相关蛋白 Cyclin D1、 ATCACGATG⁃3′。
Cyclin E1的表达（图6）。 2.8 5′⁃RACE结果

2.7 目的基因扩增及3′⁃RACE结果 以样品提取的总 RNA 作为模板，加入 1 μL 5′⁃
以样品提取的总RNA作为模板，反转录后进行 RACE adaptor 反转录为cDNA，进行5′⁃RACE第1轮
PCR扩增uc004coz.1，琼脂糖凝胶电泳结果如图7A， PCR，以第1轮PCR产物为模板，以反向引物进行第

基因 uc004coz.1 表达丰度较高，尝试进行 3′⁃RACE 2 轮 PCR 扩增，琼脂糖凝胶电泳结果如图 8A 所示。
及5′⁃RACE。以样品提取的总RNA进行加尾，以加 对目的条带进行切胶回收，进行TA克隆，挑取10个

尾产物为模板进行cDNA反转录，进行3′⁃RACE第1 菌落进行菌液PCR，琼脂糖凝胶电泳结果如图8B所
轮 PCR。 以 第 1 轮 PCR 产 物 为 模 板 进 行 第 2 轮 示，挑取 1、4、6、10 号进行测序。测序结果：5′⁃AA⁃
PCR，琼脂糖凝胶电泳结果如图7B所示。目的条带 GATTCTAATTTAAACTATTCTCTGTTCTTTCATGGG⁃

A siNC si⁃uc004coz.1 B
G1：52.59% G1：57.92%
80 G0/G1 S G2
S：33.27% S：20.81%
400 400
G2：19.89% G2：15.35% 60
300 300 （%）
Count 200 Count 200 Distribution 40 **

100 100 20 **
0
siNC si⁃uc004coz.1
0 0
0 200 400 600 800 1 000 0 200 400 600 800 1 000
FL2⁃A FL2⁃A
A：The cell cycle graphs of siNC and si⁃uc004coz.1 were detected by flow cytometry. B：Statistical results of cell number in each cell cycle. Com⁃
**
pared to the siNC group，P < 0.01（n=3）.
图5 流式细胞仪检测细胞周期
Figure 5 Cell cycle was measured by flow cytometry

si⁃uc004coz.1
siNC
Relative expression of Cyclin B1 Relative expression of Cyclin D1 Relative expression of Cyclin E1 **
Cyclin B1 55 kDa 1.5 1.5 1.5
Cyclin D1 36 kDa 1.0 1.0 1.0
Cyclin E1 48 kDa 0.5 0.5 ** 0.5
GAPDH 36 kDa 0 siNC si⁃uc004coz.1 0 siNC si⁃uc004coz.1 0 siNC si⁃uc004coz.1

The expressions of Cyclin B1，Cyclin D1，and Cyclin E1 were detected by Western blot，GAPDH representing the internal reference. The gray scale
**
of the protein strip was analyzed by Image J and GraphPad Prism 7 statistical software. Compared to the siNC group，P < 0.01（n=3）.
图6 Western blot 检测蛋白表达
Figure 6 Protein expression was detected by Western blot