Page 24 - 南京医科大学学报自然科学版
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第41卷第11期
               ·1586 ·                           南 京    医 科 大 学 学         报                        2021年11月


                  女 性 性 功 能 障 碍（female sexual dysfunction，      美容整形外科，2017年10月—2018年5月对在此科
              FSD）是一种病因复杂的盆底功能障碍性疾病，受年                          室行阴道紧缩术的、无其他妇科疾病的女性，使用
              龄、种族、月经状况、人际关系、心理健康等多重因                           自制问卷、焦虑自评量表（self⁃rating anxiety scale，
              素影响，严重影响夫妻关系的和谐               ［1-2］ 。《诊断与统计       SAS）、抑郁自评量表（self⁃rating depression scale，
              手册：精神障碍》5版将FSD 分为：女性性欲⁃唤起障                        SDS）、中文版女性性功能指数量表（Chinese version
                                             ［3］
              碍、女性性高潮障碍和性交痛障碍 。据估计，FSD                          of female sexual function index，CVFSFI）收集志愿者
              的全球发生率为 25.8%~91.0% ，而中国城市女性                      的一般资料，并评估其焦虑抑郁情况及性功能障碍
                                          ［2］
              阴道润滑障碍（lubrication disorder，LD）、性高潮障              程度。剔除存在焦虑抑郁症状的患者后，随机选择
              碍、性唤起障碍、性欲低下以及性交痛的发生率分                            6例阴道润滑维度单项评分＜3.9分者作为LD 组以
              别为 36.8%、30.6%、25.4%、23.6%和 21.8% ，其中             及6例总体评分＞25分且LD单项评分＞3.9分者为
                                                    ［4］
              LD 为最常见类型。虽然 LD 的发生率如此之高，但                        对照组。纳入标准如下：① 成年汉族女性，具有中
              受传统文化的影响，女性羞于表达自己的烦恼和诉                            等以上学历；②无其他基础妇科疾病；③计划接受

              求，尤其是涉及性需求相关的问题，这使得患有 LD                          阴道紧缩术。本研究使用《中文版女性性功能指数
                                                ［5］
              的女性在中国并没有受到足够的重视 。因此，亟                            评估表》进行评估。在手术过程中，取LD组和对照
              需相关研究来阐明 LD 的发病机制等问题，为其诊                          组女性的阴道上皮组织置于冻存管，随后立即保存
              疗提供线索和依据。                                         在液氮中待用。本研究经南京医科大学附属妇产
                  近年来，随着基因测序分析技术的盛行，非编码                         医院伦理委员会批准（宁妇伦字〔2014〕64号）。
              RNA作为基因调节器的一部分在人类疾病的发生发                           1.2  方法
              展中起着至关重要的作用             ［6- 7］ ，而长链非编码 RNA        1.2.1 组织RNA提取及下一代测序技术
             （long non⁃coding RNA，lncRNA）更是引起了人们的广                   组织 RNA 提取使用 QIAzol 裂解液（Qiagen 公
                    ［8］
              泛关注 。lncRNA是指长度超过200个核苷酸的转                        司，德国）进行，按照说明书上的步骤提取样本总
              录本  ［9-10］ ，其生物学功能包括：①顺式或反式转录调节                   RNA。提取出的样本 RNA 的质量和浓度通过分光
              因子；②mRNA加工、转录后调控和蛋白活性的调节                          光度计 ND⁃1000（Thermo Fisher 公司，美国）检测。
                                   ［9］
              因子；③核结构域的调节 。lncRNA具有多种调控方                        RNA 提取完成后，cDNA 文库的构建和下一代测序
              式，它不仅可以作为miRNA的前体在生物体内发挥                          全部由北京博奥生物集团有限公司完成。RNA 中
              作用，而且还对mRNA有调控作用。根据lncRNA不                        的 rRNA 经 Ribo⁃Zero Magnetic Kit（Epicentre 公司，
                                                                                   TM
              同的调控方式，lncRNA与mRNA之间的关联关系也                        美国）去除，线性 RNA 用 Ribonuclease R 酶（Epicen⁃
              较多，包括 Antisense 关系、Cis 关系以及 Trans 关系，             tre公司，美国）消化。cDNA文库的构建根据TruSeq
                                                         ［11］
              不同的lncRNA⁃mRNA关系可能行使不同的功能 。                       文库构建流程完成。通过 Illumina Cluster Genera⁃
              先前研究发现 miR⁃137 可以通过下调 Aquaporin⁃2                 tion成簇，通过Illumina Hiseq 2500完成测序。
             （AQP2）的表达抑制阴道上皮细胞的通透性，这表明                          1.2.2 测序数据质控
              miRNA可能通过降低AQP2的蛋白水平参与LD的发                             使用 FastQC 软件评估 fastq 格式的原始数据的
                    ［12］
              生发展 。因此，有理由认为lncRNA可能与LD的发                        测序质量；使用 NGSQC 软件对原始数据进行过滤，
              病机制有关，而其间的相互作用也值得深入研究。                            删除低质量及含 N 高于 5%的不满足分析标准的
                  本研究为了探索 LD 中的差异表达 lncRNA⁃                     reads，得到可用于后续比对、统计以及分析的 clean
              mRNA 网络，进一步了解 LD 的潜在发病机制，利用                       reads；选用人类基因组的 hg19（UCSC）基因组作为
              下一代测序中 LD 患者 lncRNA 测序数据，筛选出阴                     参考，使用具有默认参数的 Tophat2 将高质量的纯
              道上皮组织与对照组织中差异 lncRNA，并以候选                         净读段与参考基因组进行比对。
              lncRNA 为中心构建了 lncRNA⁃mRNA 共表达网络，                  1.2.3 序列回帖
              并预测了其生物学功能。                                            回帖结果统计主要包括对所有 reads 总体的比
                                                                对情况统计以及饱和度分析，通过 Picard 软件统计
              1  对象和方法
                                                                reads 比对的位置分布、reads 均一性分布等。本研
              1.1  对象                                           究以 reads 的总体回帖率≥70%，且多重比对率≤
                  研究对象来源于南京医科大学附属妇产医院                           10%为回帖标准。根据 reads 回帖到参考基因组上
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