Page 10 - 南京医科大学学报自然科学版

第41卷第4期
·480 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2021年4月

表1 Ninj2敲除小鼠全身表型分析 过对 3 种基因型小鼠体重的连续称量，发现与野生
Table l Analysis of whole body phenotype of Ninj2 knock⁃ 型和杂合型相比，敲除小鼠体重无显著性差异（图
out mice 2B）；经过统计分析配繁21周Ninj2敲除小鼠的子代
检测项目 Ninj2 +/+ Ninj2 -/- t 值 P值
累计出生数量，发现 Ninj2 敲除小鼠累计产仔数与
卵巢体重比（%）00.043 ± 0.002 00.046 ± 0.002 1.718 0.161
野生型与杂合小鼠相比没有差异（图 2C）。由此可
ALT（U/L） 030.33 ± 1.25 033.33 ± 1.25 2.405 0.074
以说明，Ninj2敲除不影响小鼠生育力及仔鼠发育。
GLU（mmol/L） 005.97 ± 0.21 005.47 ± 0.17 2.652 0.057
TC（mg/dL） 002.53 ± 0.13 002.47 ± 0.13 0.535 0.621 2.4 Ninj2敲除小鼠表型分析
首先，我们从形态学角度对卵巢发育情况进行
BUN（mmol/L） 010.73 ± 1.070 011.73 ± 0.450 1.223 0.289
UA（μmol/L） 105.67 ± 3.40 111.67 ± 3.40 1.765 0.152 了分析。通过免疫荧光染色与卵泡计数，我们发现
Ninj2 敲除小鼠新生卵巢中卵泡激活情况与野生型

A B C
45 20 90
40 39 （ 只 ） 80
（ 只 ） 35 （ g ） 15 70
30
60
幼仔数量 20 21 17 体重 10 Ninj2 +/+ 小鼠累计出生量 40 Ninj2 +/+
50
25
15
30
+/-
10
Ninj2
5 5 Ninj2 +/- 20 Ninj2 -/-
10
-/-
Ninj2
0 0 0
9
11
10
12
14
13
Ninj2 +/+ Ninj2 +/- Ninj2 -/- 2周 3周 4周 5周 6周 7周 8周 3 4 5 6 7 8 配繁时间（周） 15 16 17 18 19 20 21
A：Ninj2杂合敲除小鼠子代基因型比例；B：2~8周龄小鼠体重（P＞0.05，n=3）；C：Ninj2杂合、纯合敲除小鼠与野生型小鼠配繁21周的子代
累计出生数量。
图2 Ninj2敲除小鼠生育信息分析
Figure 2 Analysis of fertility information of Ninj2 knockout mice
对照组相比没有明显差别（图 3A、B）。通过对成年
3 讨 论
6 周龄敲除小鼠卵巢进行 HE 染色和卵泡计数，发
现Ninj2敲除小鼠成年卵巢中卵泡数量和对照组相 通过数据库查询以及实验验证，我们证明了
比没有异常（图 3C、D），以上数据均表明敲除 Ninj2 Ninj2在小鼠卵巢中特异性高表达。为了研究Ninj2
不影响雌性小鼠的生殖发育。为进一步排除 Ninj2 在雌性小鼠生殖发育中的作用，借助 CRISPR/Cas9
是否在胚胎发育过程中存在异常现象，我们对Ninj2 技术，我们成功构建了 Ninj2 基因敲除小鼠模型。
纯合敲除小鼠进行了IVF实验，结果显示，Ninj2敲除 通过分析小鼠生育信息，我们发现敲除 Ninj2 不影
对小鼠早期胚胎发育过程没有影响（图3E）。以上数 响纯合小鼠的出生比例、体重和小鼠生育力，进一
据说明敲除Ninj2不影响小鼠的卵巢发育过程。 步分析发现 Ninj2 敲除小鼠的卵巢功能正常，并且
2.5 LPS处理Ninj2敲除小鼠表型分析 胚胎发育正常，受精卵可以正常发育。综上所述，
已有文献报道，Ninj2在LPS刺激的人血管内皮 在正常生理条件下，敲除 Ninj2 不影响雌性小鼠生
细胞（HUVEC）和小鼠主动脉中的表达上调 ，我们 殖发育。
［17］
猜测Ninj2可能参与LPS引发的炎症反应。因此，我 在有丝分裂分化后的神经元中 Ninj2 的表达显
们对成年6周龄敲除小鼠进行为期20 d的LPS处理， 著升高，在中枢神经系统中，Ninj2 被观察到在放射
观察炎症条件下 Ninj2 敲除是否影响小鼠卵巢发 状神经胶质细胞中表达。周围神经损伤后，Ninj2在
育。通过小鼠LPS 定量检测试剂盒（ELISA）对处理 远端神经节段的Schwann中上调，并且通过Ninj2介
的小鼠血液中 LPS 表达含量进行检测，结果表明 导的同源细胞相互作用促进背根神经节神经元的
［7］
LPS含量显著升高，表明LPS诱导炎症模型成功（图 神经突生长 。Ninj2可以调节LPS诱导的内皮激活
4A）。通过卵巢 HE 染色和卵泡计数，我们发现LPS 和单核细胞与内皮细胞之间的黏附，Ninj2可直接与
处理后Ninj2敲除小鼠成年卵巢中卵泡数量和野生型 Toll 样受体 4（Toll⁃like receptors 4，TLR4）相互作用，

对照组相比基本一致（图4B、C），以上数据表明LPS 对 TLR4 介导的内皮细胞激活通路至关重要 ［17］ 。
处理对Ninj2敲除小鼠的卵巢发育过程没有影响。 在小鼠中 LPS 增加了卵泡闭锁，这一过程是 TLR4