Page 22 - 南京医科大学学报自然科学版

第41卷第4期
·492 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2021年4月

学分析，采用软件 Graphpad prism 7 绘制图表。数 的变化。不同强度（4.825、19.300、43.425 mW/cm）
2
据处理时，计量资料经检验，数据符合正态分布，方 的LIPUS辐照处理巨噬细胞后，与对照组对比，凋亡
差齐，结果以均数±标准差（x ± s）表示。多组之间比 细胞所占比例未有明显变化（图 1A）。CCK⁃8 法检
较采用方差分析，P < 0.05 为差异有统计学意义。 测结果显示，与同时间点对照组相比，LIPUS辐照处
理的小鼠骨髓来源巨噬细胞活性未出现明显差异
2 结 果
（图 1B）。此外，实验通过热电偶测温技术检测了
2.1 LIPUS 对小鼠骨髓来源巨噬细胞凋亡与活性 LIPUS辐照过程中细胞培养基温度变化情况。测温
的影响 数据显示，20 min的LIPUS辐照处理过程中，培养基
为了检测所用超声强度对巨噬细胞凋亡的影 温差稳定在±1 ℃（图1C），超声辐照过程中未产生明
响，实验通过流式细胞术检测了巨噬细胞凋亡状态 显的热效应。

A LIPUS LIPUS LIPUS
对照组 4.825 mW/cm 2 19.300 mW/cm 2 43.425 mW/cm 2 8
10 4 10 4 10 4 10 4
Q1 Q2 Q1 Q2 Q1 Q2 Q1 Q2 6
10 1.53 4.92 10 1.95 4.94 10 1.54 3.85 10 2.18 4.28 （ % ） 4
3
3
3
3
凋亡率
2
2
2
PI 10 10 10 10 2
2
1
1
1
1
10 Q4 Q3 10 Q4 Q3 10 Q4 Q3 10 Q4 Q3 0
92.5 1.02 92.5 0.63 95.5 1.11 92.0 1.50
10 0 10 0 10 0 10 0 对照组 4.825 19.300 43.425
0
2
1
3
2
0
1
2
3
1
3
0
2
3
0
1
10 10 10 10 10 4 10 10 10 10 10 4 10 10 10 10 10 4 10 10 10 10 10 4
LIPUS（mW/cm）
2
Annexin V
B C
40 50 mVpp
（ % ） 150 39 100 mVpp
150 mVpp
细胞活性 100 （ ℃ ） 温度 37
38
50
36
0 35
对照组 4.825 19.300 43.425 34 0 250 500 750 1 000 1 250 1500
LIPUS（mW/cm） 时间（s）
2
A：流式细胞术检测LIPUS不同超声强度刺激对巨噬细胞凋亡影响及定量分析，各组间差异无统计学意义（n=3）；B：CCK⁃8法测定巨噬细
胞存活率，各组间差异无统计学意义（n=3）；C：热电偶程序检测LIPUS超声条件下温度变化，各组间差异无统计学意义（n=3）。
图1 LIPUS对小鼠骨髓来源巨噬细胞凋亡与活性的影响
Figure 1 Effects of LIPUS on apoptosis and viability of murine bone marrow⁃derived macrophage
2.2 LIPUS对LPS诱导巨噬细胞向M1型分化的作用 过荧光显微镜观察巨噬细胞的吞脂能力。Image J
为了检测 LIPUS 对巨噬细胞极化的作用，实验 软件分析可得对照组、LPS（100 μg/mL）组、LPS+
通过 qPCR 技术检测了 M1 型巨噬细胞标志基因白 4.825 mW/cm 组 、LPS + 19.300 mW/cm 组 、LPS +
2
2
2
介素（interleukin，IL）⁃6、IL⁃23α、肿瘤坏死因子⁃α（tu⁃ 43.425 mW/cm 组吞脂效率分别为（60.9±1.9）%、
mor necrosis factor α，TNF⁃α）、诱导型一氧化氮合酶 （72.7±1.2）%、（28.6±7.1）%、（43.1±2.6）%、（27.3±
（inducible nitric oxide synthase，iNOS）的 mRNA 水平 1.8）%，结果显示，与LPS组相比，LIPUS辐照处理明
变化。实验使用 LPS（100 μg/mL）诱导巨噬细胞向 显降低了LPS诱导的巨噬细胞的吞脂能力（图3）。
M1 型极化，结果显示，LPS 诱导能够显著上调巨噬 2.4 LIPUS对巨噬细胞NF⁃кB/MAPK信号通路活化
细胞 IL⁃6、IL⁃23α、TNF⁃α、iNOS 的 mRNA 水平。与 的影响
LPS诱导组相比，LIPUS辐照后能够下调LPS诱导的 为了阐明 LIPUS 抑制巨噬细胞 M1 型极化和减
IL⁃6、IL⁃23α、TNF⁃α、iNOS的mRNA水平（图2）。 弱巨噬细胞吞脂能力的机制，实验通过Western blot
2.3 LIPUS对M1型巨噬细胞吞噬效率的影响 技术检测了 NF⁃κB 和 MAPK 通路信号分子的变化。
为了检测 LIPUS 对 M1 型巨噬细胞吞噬能力的 与对照组相比，LPS 明显诱导了 NF⁃κB/MAPK 信号
影响，将巨噬细胞与 DiI⁃Ox⁃LDL 共培养 24 h 后，通 通路的活化，增强了 p38、ERK、JNK 和 p65 的磷酸