Page 20 - 南京医科大学学报自然科学版

第41卷第4期
·490 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2021年4月

procedures. Then，results of q⁃PCR showed that mRNA levels of M1 phenotype genes were remarkedly up⁃regulated in LPS⁃induced
macrophage compared with those in the control group，which was attenuated by LIPUS treatment（P < 0.05）. Moreover，LIPUS
treatment down regulated LPS⁃induced phagocytosis of DiI⁃labeled OX⁃LDL（P < 0.05）. Results of western blot showed that LIPUS
inhibited LPS⁃induced activation of NF⁃κB/MAPK pathways（P < 0.05）. Conclusion：Overall，our results demonstrated that LIPUS
could reduce LPS⁃induced polarization of macrophage to the M1 phenotype，and phagocytosis of lipid droplet through inactivating NF⁃
κB/MAPK pathway.
［Key words］ inflammation；LIPUS；macrophage；M1 phenotype；phagocytosis of lipid droplet；NF⁃κB/MAPKpathway
［J Nanjing Med Univ，2021，41（04）：489⁃495］

冠心病是临床最常见的心血管系统疾病之一 ， 强度的 LIPUS 进行处理，探讨 LIPUS 对巨噬细胞
［1］
也是世界范围内的主要致死疾病 ［2-4］ 。多数重症冠 M1 型极化和吞脂能力的影响及其分子机制，为冠

心病患者临床往往采用冠状动脉介入手术（percuta⁃ 心病临床无创治疗的新方法提供实验基础和理论
neous coronary intervention，PCI）治疗，但存在慢性全 依据。
闭塞（chronictotal occlusion，CTO）和严重钙化病变
1 材料和方法
等隐患，导致手术风险较大 。尽管已有相对成熟
［5］
［6］
［7］
的临床用药 ，但药物治疗往往存在药物抵抗 及 1.1 材料
不良反应 等问题，长期应用可能会对身体造成损 C57BL/6 小鼠（北京维通利华实验动物技术有
［8］
伤。我国冠心病病死率呈上升趋势，特别是农村地 限公司），集落刺激因子（granulocyte⁃macrophage col⁃
区，病死率上升明显。对冠心病的诊治需要日益强 ony⁃stimulating factor，GM⁃CSF）（R&D 公司，美国），
化的同时，仍存在因经济问题患者自行停药、拒绝 LPS（Sigma 公司，美国），DMEM 高糖培养基（Gibco
手术的情况，冠心病的医疗费用负担是造成患者治 公司，美国），青霉素、链霉素、胎牛血清（fetal bovine
疗依从性差的重要原因。急需探索和完善安全、无 serum，FBS）（Biological Industries 公司，以色列），
创、低价的物理治疗手段。 TRIzol试剂（Bioflux公司，日本），DEPC水、CCK⁃8试
巨噬细胞主要拥有参与炎症的M1型和抗炎的 剂（日本 Dojindo 公司），SybrGreen qPCR Master Mix
M2型两个极化方向 ，其炎症极化方向和吞脂能力 （含 Rox）、双蒸水（doble distilled water，ddH2O，日本
［9］
的变化，会影响泡沫细胞的形成和血管斑块脂质沉 TaKaRa 公司），SYBR Green 荧光染料、流式细胞术
积 ［10-11］ ，是冠心病发生发展的重要环节 ［12］ ，因此抑制 分析试剂盒（ThermoFisher 公司，美国），苯甲基磺酰
巨噬细胞向M1型方向极化和减弱其吞脂能力可能 氟（phenylmethylsulfonyl fluoride，PMSF）、蛋白上样
成为治疗冠心病的关键策略之一。 缓冲液、BCA 蛋白定量试剂盒（上海碧云天生物技
超声治疗利用超声波在组织中传播所产生的 术有限公司），十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶快
热效应、机械效应等生物效应达到治疗效果，是近 速制备试剂盒（上海雅酶生物科技有限公司），聚偏
年来凸显的一种新型治疗手段，目前主要处于实验 二氟乙烯（polyvinylidene fluoride，PVDF）膜（上海罗
研究阶段。其中较高频率的超声波穿透能力差，传 氏诊断产品有限公司），牛血清白蛋白（bovine se⁃
递过程中易发生较多的能量衰减，导致到达治疗部 rum albumin，BSA）（ICN 生物医学化学药品公司，美
位的能量达不到治疗数量级，一些学会判定高频超 国），DiI标记的氧化低密度脂蛋白（DiI⁃Ox⁃LDL）（广
声的疗效不确定，越来越多的学者将关注转向了低 州奕元生物技术有限公司），辣根酶标记山羊抗小
强度脉冲式超声波（low⁃intensity pulsed ultrasound， 鼠 IgG、辣根酶标记山羊抗兔 IgG（北京中杉金桥公
LIPUS）。LIPUS由于频率较低，强度不高，因而在组 司），GAPDH抗体、p65抗体、p⁃p65抗体、p38抗体、p⁃
织中传播时声能衰减低，被组织吸收少。它所产生 p38 抗体、JNK 抗体、p⁃JNK 抗体、ERK 抗体，p⁃ERK
的热效应和对组织的升温作用均接近于可忽略的 抗体（Cell Signaling Technology公司，美国）。
程度，主要通过机械效应起到治疗作用。这种声波 1.2 方法
以压力波的形式存在，可对组织细胞产生微型压力 1.2.1 原代小鼠骨髓来源的巨噬细胞分离与培养
作用 ［13］ 。本实验拟在体外通过脂多糖（lipopolysac⁃ 脊髓脱臼处死 6 周龄 C57BL/6 小鼠（实验动物
charide，LPS）诱导巨噬细胞的炎症模型，采用不同 伦理批准号：IACUC⁃2008020），酒精浸泡，取胫骨剪