Page 51 - 南京医科大学学报自然科学版

第41卷第6期 陆 敏，卢 伟，杨 勰，等. 人Wnt5a对中性粒细胞胞外诱捕网形成的影响［J］.
2021年6月 南京医科大学学报（自然科学版），2021，41（06）：826-831 ·829 ·

2.2 Wnt5a促进ROS的生成 P.gingivalis LPS刺激组（P < 0.05，图2B）。
Wnt5a、P.gingivalis LPS 或 E.coli LPS 刺激后， 2.3 PI3K/Akt 和 MEK1/2 ⁃ ERK1/2 信 号 转 导 对
ROS水平均明显高于未刺激组（P < 0.05），代表性的 Wnt5a诱导NET形成的影响
流式细胞学检测结果如图 2A 所示。其中，E.coli Western blot 检测发现，与空白对照组相比，
LPS 刺 激 后 生 成 的 ROS 数 量 明 显 高 于 Wnt5a 和 Wnt5a 和 E.coli LPS 刺激后，中性粒细胞 PI3K、Akt、

A B
1 000 1 000 1 000 *
200
* *
SSC⁃H SSC⁃H SSC⁃H （ % ） 150 * *

0 0 0 ROS 100
10 0 10 1 10 2 10 3 10 4 10 0 10 1 10 2 10 3 10 4 10 0 10 1 10 2 10 3 10 4 50
阴性对照组 空白对照组 Wnt5a组
0
E. coli LPS组
空白对照组 Wnt5a组 P. gingivalis LPS组
1 000 1 000
SSC⁃H SSC⁃H

0 0
10 0 10 1 10 2 10 3 10 4 10 0 10 1 10 2 10 3 10 4
E. coli LPS组 P. gingivalis LPS组
A：中性粒细胞ROS生成的流式细胞学检测；B：各组ROS检测值的比较。两组比较，P < 0.05（n=3）。
*
图2 Wnt5a对中性粒细胞ROS生成的影响
Figure 2 Effects of Wnt5a on ROS production in neutrophils

［7］
MEK1/2 和 ERK1/2 磷 酸 化 程 度 均 明 显 增 强（P < 泌方式产生，具有促炎作用，并参与炎症应答 。
0.05），其中，Wnt5a组ERK1/2磷酸化程度低于E.coli NET 是中性粒细胞捕获、杀灭致病菌的一种重
LPS 组（P < 0.05）。P.gingivalis LPS 刺激后，Akt、 要机制，其过量生成或清除障碍均与炎症造成的组
［8］
MEK1/2 和 ERK1/2 磷酸化程度比空白对照组强 织破坏相关 。NET 可由多种刺激物诱导形成，如
［9］
（P < 0.05）。代表性的 Western blot 检测结果如图 3 E.coli LPS、IL⁃8等 。P.gingivalis LPS是P.gingivalis
所示。 的主要毒力因子之一，可直接破坏牙周组织，并引发
为进一步证实 PI3k/Akt 和 MEK1/2、ERK1/2 磷 多种免疫炎症反应，其结构和生物学功能与最经典的
酸化在 Wnt5a 促进 NET 形成中的作用，分别采用 G 菌内毒素E.coli LPS相比，存在一定差异 ［10-11］ 。因
-
PI3K/Akt 抑制剂 LY294002 和 MEK1/2、ERK1/2 抑制 此，本研究选择 P.gingivalis LPS 和 E.col LPS 作为阳
剂U0126预处理中性粒细胞，结果发现，与相应的无 性对照。Liu 等 ［12］ 发现，在 E.coli LPS 介导的小鼠急
抑 制 剂 组 相 比 ，LY294002 和 U0126 预 处 理 后 ， 性肺损伤中可检测到 NET。牙周炎患者牙周袋脓
Wnt5a、P.gingivalis LPS 和 E.coli LPS 刺激组中性粒 性渗出物及龈沟液中也可检测到NET，后者能诱捕入
［13］
细胞胞外DNA数量均明显减少（P <0.05，图4）。 侵致病微生物，并限制其传播 。NET同样可在牙周
［14］
炎患者的菌斑生物膜及牙周袋上皮中被检测到 。
3 讨 论
本研究发现 Wnt5a 可促进中性粒细胞产生 NET，进
Wnt5a 在牙周组织，尤其是炎性牙周组织中的 而可能影响包括牙周组织在内的多种组织的免疫
表达已得到证实。Maekawa 等 发现，人牙龈组织 炎症反应的发展和转归。
［6］
中可检测到Wnt5a和分泌型卷曲相关蛋白5（secret⁃ NET 的形成主要通过两种方式，一种是依赖
ed frizzled⁃related protein 5，sFRP5）mRNA。其中，炎 ROS的经典途径，细胞被激活后1~4 h，细胞核分裂，
症组织以 Wnt5a 表达为主，健康组织以 sFRP5 表达 核膜分解，细胞去极化，染色质去浓缩，质膜破裂，
为主，采用P.gingivalis LPS刺激人牙龈上皮细胞后， 细胞死亡，释放出NET；另一种是早期快速、独立于
Wnt5a 表达上调，sFRP5 表达则下调。作为一种效 ROS 的途径，细胞被激活后 5~60 min，核膜分离，核
应分子，Wnt5a 可由巨噬细胞通过自分泌或者旁分 DNA 和线粒体 DNA 以囊泡形式排出胞外，形成