Page 52 - 南京医科大学学报自然科学版

第41卷第6期
·830 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2021年6月

A B C
* * * *
*
2.0
0.8
空白对照组 Wnt5a组 E. coli LPS组 P. gingivalis LPS组 p⁃PI3K 蛋白相对表达量 2.5 p⁃Akt 蛋白相对表达量 1.0
1.5
0.6
1.0
0.4
PI3K 85 kDa 0.5 0.2
0 0
空白对照组 E. coli LPS组 空白对照组 Wnt5a组
P. gingivalis LPS组
E. coli LPS组
85 kDa
p⁃PI3K Wnt5a组
Akt 60 kDa P. gingivalis LPS组
p⁃Akt 60 kDa
A D E *
*
MEK1/2 *
45 kDa * *
p⁃MEK1/2 45 kDa 0.8 * 1.0
0.6
44 kDa p⁃MEK1/2 蛋白相对表达量 1.0 蛋白相对表达量 1.5 *
ERK1/2 p⁃ERK1/2
42 kDa 0.4
p⁃ERK1/2 44 kDa 0.2 0.5
42 kDa
0 0
E. coli LPS组
E. coli LPS组
GADPH
空白对照组 Wnt5a组 P. gingivalis LPS组 空白对照组 Wnt5a组 P. gingivalis LPS组
36 kDa
A：Western blot检测各组PI3K、Akt、MEK1/2和ERK1/2蛋白及磷酸化蛋白的表达；B：各组p⁃PI3K蛋白表达的定量分析；C：各组p⁃Akt蛋白
表达的定量分析；D各组p⁃MEK1/2蛋白表达的定量分析；D：各组p⁃ERK1/2蛋白表达的定量分析。两组比较，P < 0.05（n=3）。
*
图3 Wnt5a对中性粒细胞PI3K、Akt、MEK1/2和ERK1/2蛋白磷酸化的影响
Figure 3 Effect of Wnt5a on phosphoralation of PI3K，Akt，MEK1/2 and ERK1/2 in neutrophils
1 000 * * * 号分子 ［17］ 。研究发现，慢性肉芽肿病患者存在
* * * NADPH 氧化酶缺陷，难以产生足够 ROS，进而导致
（ AFU） 800 无抑制剂 DNA 释放和 NET 形成缺陷 ［17］ 。研究报道，E.coli 和
U0126
600
铜绿假单胞菌能通过激活信号分子 SAPK/JNK，诱
细胞外DNA 400 LY294002 导依赖 ROS 的 NET 形成 ［18］ 。本研究发现，Wnt5a、

200 P.gingivalis LPS 和E.coli LPS 均能促进ROS 产生，进
而可能影响NET的形成。
0 PI3K/Akt 和 MEK1/2⁃ERK1/2 通路均受上游信
P. gingivalis LPS组
空白对照组 Wnt5a组 E. coli LPS组 号分子 Ras 调节。PI3K 包括脂质激酶和蛋白激酶，

两组比较，P < 0.05（n=3）。 位于 Akt 上游，可被磷脂酰肌醇⁃3，4，5⁃三磷酸通过
丝氨酸/苏氨酸激酶磷酸化激活。PI3K/Akt 广泛参
*
图4 LY294002/U0126对中性粒细胞胞外DNA形成的影响 与了细胞生长、增殖、代谢、血管生成等过程的调
Figure 4 Effects of LY294002/U0126 inhibition on extra⁃ 节。MEK1/2⁃ERK1/2 则与细胞增殖、分化、趋化、
cellular DNA formation
ROS形成等功能相关 ［19］ 。抑制PI3K能同时下调Akt
NET，细胞依然存活 ［8，15］ 。 及 Raf/MEK/ERK 信号通路 ［20］ 。抑制 PI3K 后，由
中性粒细胞能产生并释放大量抗菌肽、蛋白酶 PMA及寄生虫诱导形成的NET也受到显著抑制 。
［21］
及ROS，杀死其捕获的病原体。ROS包括超氧化物、 Fonseca 等 ［22］ 首先发现了 Raf/MEK/ERK 信号通路在
过氧化氢、羟自由基等，其产生过程被称为呼吸爆 PMA 诱导中性粒细胞形成 NET 中的作用。Raf/
发。Acquier等 ［16］ 研究发现，侵袭性牙周炎患者唾液 MEK/ERK 信号通路激活后，形成 NADPH 氧化酶复
中 ROS 水平较牙周健康者明显增高。在中性粒细 合物，产生 ROS，进而导致 NET 的形成 ［23］ 。本研究
胞脱颗粒及NET形成过程中，还原型烟酰胺腺嘌呤 发现，Wnt5a刺激中性粒细胞后可促进PI3K/AKT及
二 核 苷 酸 磷 酸（nicotinamide adenine dinucleotide MEK1/2、ERK1/2 磷 酸 化 ，PI3K/AKT 抑 制 剂
phosphate，NADPH）氧化酶产生的 ROS 是关键的信 LY294002 及 MEK1/2、ERK1/2抑制剂U0126能抑制