Page 176 - 南京医科大学学报自然科学版

第41卷第7期
·1106 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2021年7月

联合 Sanger 测序法进行补充 ［11］ 。Sanger 验证可采 同时患者妹妹和弟弟相同位点也发生了杂合变异。
用正向测序或反向测序，反向测序峰图显示的碱基 蛋白质三维结构预测：将需要预测的蛋白序列
有 可 能 为 被 检 测 碱 基 的 反 向 互 补 序 列 。 chr5 ⁃ 导入在线软件 SWISS⁃model（https：//swiss⁃model.ex⁃
78251291突变导致部分序列移码，正向测序得到的 pasy.org/interactive），选择覆盖突变位点 range 范围
图显示左侧乱峰，无法使用，故采用反向测序图。 的蛋白质同源性模型 ［12-14］ 。模型的一致性和相似度
最终确定致病的2个突变位点（图1）：①第5位 不 低 于 30% ，可 视 化 分 析 软 件 Swiss ⁃ PdbViewer
外显子上c.979C>T，导致氨基酸改变 p.R327X，为无 （http：//www.genebee.msu.su/spdbv/text/getpc.htm） ［15］

义突变，变异来源于母亲；②第4位外显子上c.724_ 绘制蛋白质三维结构图，分析预测该突变位点对蛋
725insCCCTTCAGGTCC，导 致 氨 基 酸 改 变 p. 白结构的影响。既往研究证实与野生型相比，Mu⁃
H242delinsPLQVH，为整码突变，变异来源于父亲， tant1（p.R327X）因提前终止转录而产生截短的蛋

表2 验证引物信息
引物名称 引物序列（5′→3′） 退火温度（℃） 扩增产物大小（bp）
F454⁃B8_F AAAGCTATCATTCTTGCTCAATGG 58~64 506
R454⁃B8_R ATGTCTGAATAATGAAAGGCTATGTC 58~64 506
F660⁃A1_F ATAAGGCAATGCTAACCGCTC 58~64 388
R660⁃A1_R GCATAAATCTGAACTGTCTTATCCTTC 58~64 388

突变位点1：c.979C>T（p.R327X），变异来源于母亲；突变位点2：c.724_725insCCCTTCAGGTCC（p.H242delinsPLQVH）（第242位碱基移码突
变导致后位序列发生变异，此处只截取部分），来源于父亲，且患者弟弟、妹妹携带同源变异基因。
图1 ARSB基因Sanger测序图