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第42卷第10期 郑 湘,吴周全,符国伟,等. 大黄素对CFA诱导小鼠炎性痛的作用及机制[J].
2022年10月 南京医科大学学报(自然科学版),2022,42(10):1364-1370,1401 ·1365 ·
疼痛是日常生活和临床中最常见的疾病之一, vanillic acid 4,TRPV4)、GAPDH 一抗和羊抗兔二抗
其中炎性疼痛最为常见 。炎性疼痛与炎症发生的 (Abcam 公司,美国);Nanodrop 2000 分光光度仪
[1]
区域紧密相关,这些炎症发生部位中的伤害感受器 (Thermo Fisher Scientific公司,美国)。
[位于三叉神经和背根神经节(dorsal root ganglion, 1.2 方法
DRG)中]通常在检测到外界有害的化学、热和机械 1.2.1 动物处理
[2]
刺激后,将相关信息传递至大脑并产生痛觉 。在 所有动物实验经南京医科大学附属常州第二
炎症发生部位,机体通常对有害刺激的反应增强 人民医院动物保护福利委员会批准。选取 8 周龄,
(痛觉过敏)或在正常无害刺激的条件下(痛觉异 体重(25±1)g 健康雄性 C57BL/6 小鼠进行疼痛行为
常)触发疼痛 。炎症如不及时治愈,炎性疼痛就会 学试验以及炎性疼痛小鼠模型制作。将小鼠饲养
[3]
逐渐发展成为慢性疼痛,即使后期导致炎症的伤 在温度(25±1)℃可控的微型小鼠笼中,湿度保持在
害得到干预,疼痛依然长时间持续存在 。众所 (55±5)%,光照时间维持 12 h 光照/12 h 黑暗周期,
[4]
周知,炎性疼痛将严重影响患者的生活质量和劳 并给予充足的食物和无菌蒸馏水供其自由采食。
动能力,由炎性疼痛发展成为慢性疼痛无疑给患 在炎性疼痛小鼠模型制作前1天,将12只小鼠
者的家庭和社会带来巨大的经济负担 [5] 。据报 分为 Sham 组和炎性疼痛模型组两组,每组 6 只,并
道,机械损伤和高温等物理因素以及神经系统中 测定小鼠基础伤害感受性阈值。炎性疼痛模型制
的化学物质或炎性介质可引起炎性疼痛,但引起 作如Xiang等 [14] 报道,将25 μL CFA通过皮下注射于
[6]
疼痛的确切机制目前尚未明确 。同时,限于目前 小鼠右后爪足背侧表面诱发炎性疼痛模型,Sham组
的研究基础和治疗水平,炎性疼痛的临床治疗仍是 则向小鼠右后爪足背侧表面注射等体积无菌生理
[7]
一个重要问题 。 盐水。在注射 CFA 后的 7 d 内,每隔 1 d 评估 1 次小
大黄素(1,3,8⁃三羟基⁃6⁃甲基蒽醌,emodin)是 鼠的机械痛敏和热痛敏行为。
天然的蒽醌衍生物,是大黄和茜草科、鼠李科和豆 大黄素用 DMSO 溶解后,腹腔注射时用生理盐
科等多种药用中草药的主要成分 。研究表明,大 水稀释到工作浓度。将36只小鼠随机分为6组,每
[8]
黄素具有多种生物学特性,如抗病毒、抗菌、抗炎、 组6只,前5组在小鼠足背侧注射CFA 4 d后分别将
免疫抑制和诱导凋亡等 [9-12] 。更重要的是,在大量 不同剂量的大黄素液(0、5、25、50、100 mg/kg)通过
的中医临床实践中,大黄常被用于治疗便秘或疼痛 腹腔注射给药。空白组则于小鼠足背侧表面和腹
相关疾病 。为明确大黄素在炎性疼痛中的作用,本 腔注射等体积无菌生理盐水。
[13]
研究利用弗氏完全佐剂(complete Freund’s adjuvant, 在确定最适镇痛效果的大黄素溶液剂量后,将
CFA)诱发的炎性疼痛小鼠模型,评估大黄素对CFA 24只小鼠分为4组,每组6只,CFA组和CFA+Emodin
诱发的炎性疼痛小鼠模型的镇痛作用,并进一步阐 组注射 CFA 制作炎性疼痛模型,另外 Sham 组和
明其镇痛的可能分子机制。 Sham+Emodin组则注射等体积生理盐水。在CFA注
射后第4天,分别给CFA+Emodin组和Sham+Emodin
1 材料和方法
组小鼠腹腔注射最适镇痛效果的大黄素,同时以等
1.1 材料 体积的生理盐水分别对CFA 组和Sham 组小鼠进行
C57BL/6 小鼠购自赛业模式生物研究中心(太 腹腔注射。在大黄素腹腔注射 0.5、2、4、8、12、24、
仓)有限公司[许可证号:SCXK(苏)2018⁃0003]。 48 h后分别评估小鼠的机械疼痛阈值和热痛阈值。
CFA(Sigma 公司,美国);大黄素(Sigma⁃Aldrich 公 1.2.2 疼痛行为学试验
司,美国);TRIzol试剂(Invitrogen公司,美国);Prim⁃ 1.2.2.1 机械性异常性疼痛测试
erScript MT RT Master Mix 试 剂 盒 、SYBR ® Premix 使用冯·弗雷(von Frey)尼龙丝测量小鼠机械疼
Ex Taq 试剂盒(TaKaRa 公司,日本);肿瘤坏死 痛敏感性,以评估小鼠对连续增加的尼龙丝张力作
TM
因子α(tumor necrosis factor α,TNF⁃α)、白细胞介素 出的缩爪反应。具体操作如下,将小鼠放置在底部
(interleukin,IL)⁃1β和 IL⁃6 免疫测定试剂盒(R&D 带有金属丝网的塑料笼中,让每只小鼠在测试前适
Systems公司,美国);兔抗小鼠瞬时受体电位香草酸1 应 15~30 min。在每只小鼠右后脚掌底部的中间区
(transient receptor potential vanillic acid 1,TRPV1)、 域使用von Frey尼龙丝,刺激力起始量为0.008 g,范
瞬时受体电位香草酸 4(transient receptor potential 围为0.008~2.000 g,细丝接触后爪直至弯曲,而细丝