Page 30 - 南京医科大学学报自然科学版
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第42卷第10期
·1372 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2022年10月
BALF,levels of total serum IgE and BALF IL⁃4 and IL⁃13,and TSLP expression in the lung were significantly increased in the asthma
group(P < 0.05). As compared with the asthma group,all the above indices mentioned in the puerarin group and the budesonide group
were decreased significantly(P < 0.05). Conclusion:Puerarin alleviates the airway inflammation,hyperresponsiveness,and Th2
immunity by down⁃regulating the expression levels of TSLP in a chronic experimental asthma.
[Key words] puerarin;asthma;airway inflammation;Th2 immunity;thymic stromal lymphopoietin
[J Nanjing Med Univ,2022,42(10):1371⁃1375,1408]
支气管哮喘(哮喘)是多基因参与的具有遗传 号:SYXK(苏)2013⁃0016]。该方案经南京医科大学
易感性的慢性气道炎症性疾病,其发病涉及多种炎 动物实验伦理委员会批准,实验动物在麻醉下进行
症细胞、炎性介质和复杂的细胞因子网络,以血清 所有手术,并尽一切努力最大限度减少其疼痛、痛
IgE 增高、肺组织嗜酸性粒细胞(eosnophils,EOS)浸 苦和死亡。葛根素(南京中医药大学心血管药理实
[1]
润和气道高反应性为显著的临床特征 。来源于上 验室提供);吸入性布地奈德混悬液(Astra Zeneca
皮细胞的胸腺基质淋巴细胞生成素(thymic stromal 公司,英国);TSLP多克隆抗体(Abcam公司,美国);
lymphopoietin,TSLP)在哮喘患者体内高表达 ,并 IL⁃4 和 IL⁃13 ELISA 试剂盒(R&D 公司,美国);IgE
[2]
在Th1/Th2免疫失衡中起重要作用。哮喘患者气道 ELISA试剂盒(BPB公司,美国);β⁃actin多克隆抗体
活检显示,TSLP和Th2细胞因子在哮喘患者气道上 (南京凯基生物公司)。小鼠肺功能仪(北京鑫澳成
皮细胞和固有层高表达,尤其见于气道阻塞性疾病 科技有限公司);低温高速离心机(Eppendorf 公司,
病情较重的患者 。原位杂交发现 TSLP 在哮喘气 德国);勃林格殷格翰超声雾化器(南京道森科技有
[3]
道高表达,与疾病的严重程度和 Th2 炎症趋化因子 限公司);自制小鼠雾化吸入箱。
表达密切相关 。上皮源性 TSLP 在变应性哮喘的 1.2 方法
[9]
发生发展中起着重要作用 [4-5] 。TSLP基因多态性与 1.2.1 动物分组和哮喘模型建立
哮喘和过敏症相关联。靶向抑制 TSLP 信号通路有 BALB/c雌性小鼠随机分为4组,每组8只,即正
[4]
助于阻断哮喘发展 。 常组、哮喘组、葛根素组和布地奈德组。模型建立
葛根素是从豆科植物葛根的根部提取的一种 参照文献的方法 。布地奈德组雾化吸入布地奈德
[8]
异黄酮,它的主要化学成分为4,7⁃二羟基⁃8甲⁃D葡 混 悬 液 6 mL,30 min 后 予 卵 白 蛋 白(ovabumin,
萄糖基异黄酮,是葛根中含量较多的异黄酮之一。 OVA)雾化。正常组予生理盐水腹腔注射及雾化。
葛根素作为一种中草药,据《神农本草经》记载,有 葛根素组激发前 30 min 给予 50 mg/kg 葛根素溶液
解肌退热、透发麻疹、生津止渴、升阳止泻等功效。 (溶解于生理盐水)灌胃,每天 1 次,连续 9 d。正常
葛根素已用于治疗多种疾病,具有保护神经、降糖、 组和哮喘组分别在激发前 30 min 给予腹腔注射 1%
抗氧化应激、抗过敏、改善血循环及抗骨质疏松作 DMSO。
用 。近来,国内学者研究发现葛根素可以通过抑 1.2.2 呼气阻力测定
[6]
制核因子(nuclear factor,NF)⁃κB、肿瘤坏死因子 小鼠最后次雾化24 h后,在戊巴比妥钠70 mg/kg
(tumor necrosis factor,TNF)⁃α信号通路减轻抗原诱 麻醉下行气管插管,设置呼吸机潮气量 6 mL/kg,呼
导的气道炎症和气道高反应性 。本研究通过建立 吸频率为 90 次/min,吸呼比为 1∶1。静注氯化乙酰
[7]
哮喘小鼠模型,观察葛根素对气道炎症、气道高反 胆 碱(ACh,剂 量 分 别 为 10、30、90、270 μg/kg,泵
应性和Th2免疫以及TSLP表达的影响,旨在从分子 入),连续记录激发前、后的呼气阻力(Re)值。
水平探讨葛根素治疗哮喘的可能作用机制。 1.2.3 酶联免疫吸附实验
OVA末次激发24 h后,处死小鼠,立即摘眼球取
1 材料和方法
血,4 ℃、4 000 r/min离心15 min获取血清。用1 mL
1.1 材料 PBS液行支气管肺泡灌洗,回收率均 > 85%。BALF
6~8 周龄 SPF 级 BALB/c 雌性小鼠 32 只,体重 4 ℃、1 500 r/min 离心 10 min,收集上清。ELISA 法
(20±2)g,购自北京维通利华实验动物有限公司,交 检测血清总IgE、BALF液中白介素(interleukin,IL)⁃4
由南京医科大学动物实验中心饲养[动物许可证编 和 IL⁃13 含量,具体步骤按试剂盒说明书进行。在