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第42卷第2期 胡默然，吴周璐，赵晨曦，等. 神经节苷脂 GM3在非酒精性脂肪肝炎小鼠肝脏中的表达变化［J］.
2022年2月 南京医科大学学报（自然科学版），2022，42（02）：153-159 ·155 ·

1.2.2 小鼠血清生化指标检测 中肝细胞损伤指标 AST 和 ALT 的水平，结果显示，
取各组小鼠空腹血清，按试剂盒说明书检测血 NASH 小鼠中血清 AST、ALT 显著高于正常组小鼠
清生化指标丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotrans⁃ （P=0.012、P=0.001）。由此证明 NASH 组小鼠造模
ferase，ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（aspartate ami⁃ 成功（图2）。
notransferase，AST）水平。读取酶标仪 450 nm 波长
对照组 NASH组
处吸光度值，采用相应软件绘制标准曲线，得到各
样品检测值。
1.2.3 小鼠肝脏组织病理学检查
小鼠部分肝组织，以生理盐水洗涤，于 4%多聚
甲醛中固定 24 h，石蜡包埋、切片后行 HE 染色，于

光镜下评估肝脏脂肪变性和炎症活动情况。NASH
橙色箭头：脂肪变（脂质空泡）；绿色箭头：炎症灶；蓝色箭头：气
的病理诊断标准采用《亚太地区非酒精性脂肪性肝
球样变；标尺：100 μm（×200）。
病诊断与治疗共识》推荐的美国国立卫生研究院 图1 对照组和NASH组小鼠肝脏切片HE染色（×200）
NASH 临床研究网络病理委员会 2005 年所定指 Figure 1 HE staining of liver sections in mice from con⁃
南 ［22］ ，根据其制定的 NAFLD 活动度积分（NAFLD trol and NASH group
activity score，NAS）进行评估。
1.2.4 高通量靶向脂质组学方法
800
使用氯仿∶甲醇（1∶1）从血清样本中提取脂质，
P=0.012
采用 Exion UPLC⁃QTRAP 6500 PLUS（Sciex）液质联 600
用仪，以电喷雾电离（ESI）模式进行所有分析。通过 （ U/L ）
加入以下内标进行脂质量化：Cer⁃d18：1/17：0， 400
AST
GlcCer⁃d18：1/8：0，d3⁃LacCer⁃d18：1/16：0，d3⁃GM3
d18：1/18：0。使用四极飞行质谱仪（QTOF micro）及 200
ACQUITY UPLC 系统进行检测分析。
0
1.3 统计学方法 对照组 NASH组
采用 SPSS 23.0 软件建立数据库并进行统计分 500 P=0.001
析，对各项指标进行正态性分布的检验和方差齐性
400
检验。GraphPad Prism 9 软件制图。正态分布的计
量资料以均数±标准差（x ± s）表示，组间比较采用独 （ U/L ） 300
立样本t检验。不符合正态性分布的数据采用曼⁃惠 ALT
特尼检验。P < 0.05为差异有统计学意义。 200
100
2 结 果
0
2.1 NASH小鼠模型成功建立 对照组 NASH组
为了构建 NASH 小鼠模型，采用高脂高糖饮食 图2 小鼠血清肝损标志物AST、ALT水平
喂养小鼠7个月。肝脏HE染色结果显示，普通饮食 Figure 2 Measurement of serum liver injury markers of
对照组小鼠肝脏细胞排列整齐，细胞质均匀；高脂 AST and ALT
高糖饮食模型组小鼠肝小叶结构紊乱，可见大量气 2.2 小鼠肝脏鞘糖脂检测结果
球样变细胞，肝脏细胞胞质内呈现大小不一的脂滴 为研究NASH模型鼠肝脏内鞘糖脂含量及亚类
空泡，局部可见炎症灶，表示模型组小鼠肝脏较对 是否发生变化，进一步探索鞘糖脂代谢通路与
照组有严重的脂质堆积和炎症反应（图 1）。按照 NASH病理变化的内在关联，采用LC⁃MS/MS方法对
NAS 评分标准对其进行诊断（NAS≥5 分可明确诊 NASH模型鼠及健康对照组小鼠肝脏进行脂质谱检
断 NASH；NAS<3 分可排除 NASH；3~4 分表示处在 测。结果显示，与对照组小鼠相比，NASH组小鼠肝
NAFL~NASH 病程之间）。进一步检测了小鼠血清 脏中总Cer和总LacCer含量显著上升（图3），与既往