Page 114 - 南京医科大学学报自然科学版
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第42卷第3期
               ·416 ·                            南 京    医 科 大 学 学         报                        2022年3月


                        ［2］
              盘传给婴儿 ，具有高生物蓄积性、半挥发性和持久                           氯化钠5.0 g，琼脂15.0 g/L）。采样流量设为28 L/min。
              性的特点。随着经济的快速发展，特别是城市人口                            采样结束后，平皿于 37 ℃培养 48 h，之后用生理盐
              和机动车的迅猛增长，家庭燃煤取暖和汽车尾气排                            水冲洗，收集冲洗液，8 000 r/min室温离心5 min，去
              放等因素使得 PAH 成为我国城市空气中不容忽视                          上清，沉淀于-80 ℃保存待测。
              的重点污染物之一         ［3-5］ 。长期慢性暴露PAH 会诱发             1.2.5 样品检测
                               ［6］
              DNA加合物的形成 、染色体畸变，可引起成人和儿                               大气PAH浓度测定：使用镊子和不锈钢剪刀将
              童肺功能下降，增加慢性阻塞性肺病的发病率和死                            滤膜对半剪开，待测样品置于干净的锥形瓶中，加
              亡率  ［7-9］ 。不同于SO2、NO2、CO、O3、PM2.5和PM10等空          入 50 mL 二氯甲烷、40 μL 1 μg/mL 的内标（菲 Phe⁃
              气污染物的强制性监测，大气中PAH的含量目前在                           d10，屈Chr⁃d12，Supelco公司，美国），密封超声萃取

              我国暂无权威官方数据发布。最近有报道称，PAH                           40 min（80%超声强度），10 mL 上清液移入试管，
              污染可改变与健康结局相关的共生和环境细菌的                             40 ℃氮气浓缩近干，用200 μL二氯甲烷定容。实验
              种类和丰度，导致微生物种群的失衡，进而危及人                            前，所有玻璃仪器须用色谱纯甲醇浸泡，后用色谱
              体健康   ［10］ 。因此，本研究通过分析大气PAH含量与                    纯二氯甲烷润洗。标准曲线的配制：用二氯甲烷稀
              空气微生物种群的相关关系，为评估大气PAH健康                           释 20 μg/mL 标准品到 100、50、10、5、1 ng/mL（分别加
              风险提供科学依据。                                         50 μL 1 μg/mL 的内标），上机测定以同位素为内标

                                                                进行校准。GC⁃MS 气相色谱⁃质谱联用仪（TRACE
              1  材料和方法
                                                                1310，赛默飞世尔科技公司，美国），色谱柱（DB⁃5MS，
              1.1  材料                                           30 m，液膜厚0.25 μm，内径0.25 mm）。升温程序：初
                  利用 KC⁃120H 型智能中流量 TSP 采样器（青岛                  始柱温80 ℃，保持2 min，8 ℃/min升至300 ℃，保持此
              崂山电子仪器总厂有限公司），玻璃纤维滤膜采集                            温度10 min。载气：高纯氦气；流速：1.0 mL/min；进样
              大气中的颗粒态 PAH。利用国产 JWL⁃6 撞击式空                       量：2 μL；进样口温度：260 ℃；进样方式：不分流进
              气生物粒子采样器（常州康华仪器）进行空气微生                            样。离子源：EI；离子源温度：280 ℃传输线温度
              物取样测定。                                            280 ℃；扫描方式：SRM扫描。对EPA 16种优控PAH
              1.2  方法                                           的混合标准溶液（20 μg/mL，Supelco 公司，美国）进
              1.2.1 采样点设置                                       行浓度测定：萘 Nap、苊烯 Any、苊 Ana、芴 Flu、菲
                  本研究的观测采样点位于南京市江宁区南京医                          Phe、蒽Ant、荧蒽Fla、芘Pyr、苯并［a］蒽BaA、屈Chr、
              科大学至诚楼外，采样高度为1 m。该区域远离工厂                          苯并［b］荧蒽 BbF、苯并［k］荧蒽 BkF、苯并［a］芘
              排放源，距离采样点500 m有双向6车道马路。                           BaP、茚并［1，2，3⁃cd］芘InP、二苯并［a，h］蒽DBA、苯
              1.2.2 采样时间                                        并［g，h，i］苝 BgP。Phe⁃d10 和 Chr ⁃d12 回收率分别
                  大气PAH采样时间段为2019年4月16日—6月                      为 66.8%和 123.7%。每次采样时均采用野外空白，
              11日、9月20日—11月15日；2020年5月4日—6月                     将空白滤膜放置于采样器旁，与其他样品处理方法
              7日、9月27日—11月18日每次采样时间为2 h。同                       相同，最后扣除空白浓度。13种PAH的仪器检出限
              时进行空气微生物采集，采集时间为20 min。                           在 0.02~0.20 ng/mL（其中萘、苊烯和苊回收率不佳，
              1.2.3 大气颗粒型PAH样品采集                                未纳入计算）。
                  采样方法依据《环境空气质量手工监测技术规                               空气微生物多样性分析：根据 E.Z.N.A. soil 试
                                                                                                       ®
              范》HJ 194⁃2017。为保证实验精度，滤膜经干燥箱                      剂盒（Omega Bio⁃tek 公司，美国）说明书进行总DNA
              充分干燥处理。采样流量设为 100 L/min。采样结                       抽 提 。 采 用 引 物（338F：5′ ⁃ ACTCCTACGGGAG⁃
              束后，玻璃纤维滤膜用锡纸包裹置于干燥箱避光至                            GCAGCAG ⁃ 3′ ；806R：5′ ⁃ GGACTACHVGGGTWTC⁃
              少 24 h，放入-20 ℃冰箱保存待测。每次采样均设                       TAAT⁃3′）对细菌 16S rRNA 基因的 V3⁃V4 可变区进
              置空白。                                              行PCR扩增（ABI GeneAmp 9700型）。扩增体系为
                                                                                        ®
              1.2.4 大气微生物样品采集                                   20 μL：4 μL 5×Fast Pfu 缓冲液，2 μL 2.5 mmol/L

                  采 样 依 据《公 共 场 所 卫 生 检 验 方 法》GB/T              dNTPs，0.8 μL 引物（5 μmol/L），0.4 μL Fast Pfu 聚合
              18204.3⁃2013 第 3 部分：空气微生物。采样皿为普                   酶，10 ng DNA模板。PCR条件如下：95 ℃变性3 min，
              通营养琼脂培养基（蛋白胨10.0 g，牛肉浸出粉3.0 g，                    27次循环（95°C 30s变性，55 ℃ 30 s退火，72 ℃ 45 s
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