Page 84 - 南京医科大学学报自然科学版

第42卷第5期
·680 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2022年5月

因。与皮下脂肪相比，内脏脂肪（viscer aladipose 共28例，每例组织量在1~2 g。排除标准：既往有甲
tissue，VAT）与血脂异常、胰岛素抵抗、冠状动脉粥 状腺疾病史；严重肝肾功能异常；患者入院前1个月
样硬化等的发生发展关系更密切，危害更大 。已 有其他手术史以及服用影响脂肪功能的药物，如糖皮
［3］
有研究发现，人体内不仅存在储存能量的白色脂肪 质激素、噻唑烷二酮类。术前收集患者基本资料包括
（white adipose tissue，WAT），还具有消耗能量的棕 性别、年龄、既往疾病史、服药情况。测量身高、体重、
色脂肪。在成人体内发现的棕色脂肪可能主要由 血压、腰臀围。空腹抽取静脉血，检测甲状腺功能、肝
米色脂肪构成。大部分米色脂肪由具米色化功能 肾功能、血脂、血糖、糖化血红蛋白。本研究经本院伦
的白色前脂肪细胞分化而来，也可以由白色脂肪细 理委员会批准，所有患者知情同意。
胞直接转化而来 ［4-6］ 。米色脂肪含有丰富的解偶联 1.2 方法
蛋白 1（uncoupling protein 1，UCP1），通过解偶联线 1.2.1 组织总RNA提取和cDNA逆转录
粒体氧化磷酸化，使多余的能量以热量形式散发， 从手术室收取大网膜脂肪组织后立即放入液
从而减少脂肪蓄积 ［5-6］ 。 氮速冻，并转移至实验室-80 ℃冰箱保存。提取组
甲状腺激素不仅影响生物的生长、发育和新陈 织总 RNA 时，取出组织，加入 300 μL TRIzol （Cat
®
代谢，在脂肪组织的发育、增殖、分化及代谢等方面 No.15596018，Thermo Fisher Scientific 公司，美国），
也起着重要调节作用 。而甲状腺激素要在机体中 匀浆机充分研磨组织（冰上操作），按试剂盒［Prime⁃
［7］
发挥作用依赖于包括血循环中甲状腺激素水平、甲 Script RT Master Mix（Perfect Real Time），Cat No.
状腺激素转运体、脱碘酶、甲状腺激素受体在内的 RR036A，TAKRA Bio 公司，日本］方法进行组织总
［8］
甲状腺激素合成和代谢系统 。研究早已证实促甲 RNA抽提及cDNA逆转录。
状腺激素（thyroid⁃stimulating hormone，TSH）水平与 1.2.2 荧光实时定量PCR
体重指数（body mass index，BMI）成正相关，而甲状 以上述组织 cDNA 为模板，用相关引物进行
腺激素水平降低导致脂肪蓄积 ［9-11］ 。但是，目前尚 PCR 扩增。定量 PCR 总反应体系为 10 μL，反应条
无在甲状腺功能正常情况下，甲状腺激素合成和代 件：95 ℃预变性10 min，94 ℃变性30 s，60 ℃退火30 s，
谢相关基因与内脏脂肪米色化功能关系的研究。 72 ℃延伸 40 s，80 ℃读板 5 s，40 个循环，72 ℃~
本研究以甲状腺功能正常的肥胖人群为研究对象， 94 ℃，每升高0.5 ℃读1次作出熔解曲线。以GAPDH
探讨了甲状腺激素合成和代谢相关基因表达与内 基因作为内参照，对目的基因的表达量进行分析。
脏脂肪米色化的关系。 本研究所使用的引物序列详见表1。
1.3 统计学方法
1 对象和方法
计数资料采用例数表示，计量数据以均数±标
1.1 对象 准差（x ± s）表示，运用 IBM SPSS 23.0 软件和 Graph⁃
收集甲状腺功能正常［正常范围为游离三碘甲 pad 8.0 软件进行数据统计分析和绘图。计数变量
状腺原氨酸（FT）33.10~6.80 pmol/L ；游 离 甲 状 腺 的比较采用卡方检验，连续变量组间比较采用 t 检
素（FT4）12.0~22.0 pmol/L ；TSH 0.27~4.20 mU/L］ 验，相关性分析采用偏相关分析。P < 0.05 为差异
的减重代谢外科及胆道手术患者的大网膜脂肪组织 有统计学意义。

表1 荧光实时定量PCR引物序列
Table 1 Primers for realtime PCR
基因 上游（5′→3′） 下游（5′→3′）
SLCO1C1 TCCTCAGGCATAGTGGGAAG ACACTGGAGCTGGGATTCCT
SLC16A2 GGACTACCATGTGGCCTTCT AGATTGGTTCCTCAGGGTTG
SLC16A10 CTGGCTGGCTTTACTTACCG GGTATTCCAACTGCCCACAC
DIO2 ATTGGGCCACTTCCTAATGC TTGCTGCCTAAGACGGGTAG
TSHB TCAACACCACCATCTGTGCT GCACTTGCCACACTTACAGC
UCP1 CACCTTCCCGCTGGACACT CCCTAGGACACCTTTATACCTAATGG
PRDM16 CGAGGCCCCTGTCTACATTC GCTCCCATCCGAAGTCTGTC
GAPDH ACAACTTTGGTATCGTGGAAGG GCCATCACGCCACAGTTTC