Page 41 - 南京医科大学学报自然科学版

第42卷第9期 南京医科大学学报（自然科学版）
2022年9月 Journal of Nanjing Medical University（Natural Sciences） ·1235 ·

·基础研究·

重组酶介导的肠出血性大肠杆菌O157：H7等温扩增方法的建立

蔡 欣 ，王源林 ，赵 杰 ，匡 衡 ，孙学伟 ，刘宗财 ，崔 茜 ，杨 展 ，汪茂荣 1*
2，3
2，5
2，6
2，4
1，2
7
1
2*
安徽医科大学八一临床学院东部战区总医院秦淮医疗区肝病科教研室，安徽 合肥 230000；东部战区疾病预防控制中心，
1 2
江苏 南京 210002；中国人民解放军空军93801部队医院医疗所，陕西 咸阳 712201；南京医科大学第一临床医学院感
4
3
染病科，江苏 南京 210029；滨州医学院基础医学院，山东 烟台 264003；空军军医大学军事预防医学系，陕西 西安
6
5
710032；东部战区空军医院呼吸内科，江苏 南京 210001
7
［摘 要］ 目的：建立新的快速检测常见食源性致病微生物肠出血性大肠杆菌（enterohemorrhagic E.coli，EHEC）O157：H7的方
法。方法：根据EHECO157：H7保守区序列，结合重组酶介导的恒温扩增（recombinase⁃aided amplification，RAA）和荧光定量或
胶体金侧向流免疫层析试纸条（lateral flow dipstick，LFD），建立两种EHEC O157：H7检测方法（RAA荧光法和RAA⁃LFD法）并
进行优化，评估这两种方法的灵敏性及特异性。结果：两种检测方法均可在39 ℃恒温条件下16 min内完成检测，两种方法的
检测限均可达1×10 拷贝数，具有较高的灵敏性。两种方法与其他常见的肠道致病菌（金黄色葡萄球菌、沙门氏杆菌、弯曲菌、
4
耶尔森菌、志贺杆菌）质粒模板无交叉反应，具有良好的特异性。结论：本研究建立的两种检测EHEC O157：H7的方法，检测时
间短并具有较好的特异性、灵敏性和重复性，可用于EHEC O157：H7的快速检测。
［关键词］ EHEC O157：H7；RAA；快速检测
［中图分类号］ R516.1 ［文献标志码］ A ［文章编号］ 1007⁃4368（2022）09⁃1235⁃06
doi：10.7655/NYDXBNS20220906

Establishment of recombinase⁃aided amplification method for EHEC O157：H7
1，2 2，3 2，4 1 2，5 2，6 7
CAI Xin ，WANG Yuanlin ，ZHAO Jie ，KUANG Heng ，SUN Xuewei ，LIU Zongcai ，CUI Qian ，YANG
2*
Zhan ，WANG Maorong 1*
Department of Hepatology，Qinhuai Medical District，General Hospital of Eastern Theater Command，Bayi Clinical
1
College，Anhui Medical University，Hefei 230000；Center for Disease Control and Prevention of Eastern Theater
2
Command，Nanjing 210002；Medical Clinic of PLA Air Force 93801 Military Hospital，Xianyang 712201；
3
Department of Infectious Diseases，the First Clinical College of Nanjing Medical University，Nanjing 210029；School
4 5
of Basic Medical Sciences，Binzhou Medical College，Yantai 264003；Department of Military Preventive Medicine，Air
6
Force Military Medical University，Xi’an 710032；Department of Respiratory Medicine，Air Force Hospital of Eastern
7
Theater Command，Nanjing 210001，China

［Abstract］ Objective：This study aims to to develop rapid detection methods and establish a new method for a common foodborne
pathogenic microorganism enterohemorrhagic E.coli（EHEC）O157：H7 detection. Methods：Two EHEC O157：H7 detection methods
were established and optimized based on the conserved region sequence of EHEC O157：H7 combined with recombinase ⁃ aided
amplification（RAA）and fluorescence quantitative method or lateral flow dipstick（LFD），then the sensitivity and specificity of the two
methods（RAA fluorescence method and RAA ⁃ LFD method）were evaluated. Results：Both detection methods can be completed
4
within 16 min at 39 ℃，and can detect 1×10 copies，showing high sensitivity. The two methods did not cross react with plasmid
templates of other common intestinal pathogens（Staphylococcus aureus，Salmonella，Campylobacter，Yersinia，Shigella）and showed
good specificity. Conclusion：The two EHEC O157：H7 detection methods established in this study have short detection time，good
specificity，sensitivity and repeatability，and can be used for rapid detection of EHEC O157：H7.
［Key words］ EHEC O157：H7；RAA；rapid detection
［J Nanjing Med Univ，2022，42（09）：1235⁃1239，1252］
［基金项目］ 国家自然科学基金（81871242）；江苏省社会发展项目（BE2016617）
∗
通信作者（Corresponding author），E⁃mail：breezezhan@126.com；maorongwang@126.com