Page 44 - 南京医科大学学报自然科学版

第42卷第9期
·1238 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2022年9月

A B 0.2 μL 0.4 μL 0.6 μL
1.5 μL 1.8 μL 2.1 μL
0.8 μL 1.0 μL
2.4 μL 2.7 μL
14 000 12 000
12 000
10 000
10 000 8 000
（ mV ） 8 000 （ mV ） 6 000
荧光值 6 000 荧光值

4 000 4 000
2 000
2 000
0 0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 0 2 4 6 8 10 12 14 16
时间（min） 时间（min）
A：引物的浓度优化；B：探针的浓度优化。
图2 引物和探针的浓度优化
Figure 2 Concentration optimization of primers and probes

表2 EHEC O157：H7 RAA⁃LFD法检测引物和探针核酸序列
Table 2 Sequences of primers and probe for RAA⁃LFD assay for EHEC O157：H7

引物/探针 序列（5′→3′）
E⁃F2 TTCACATGTTACCTTTCCAGGTACAASAGCG
E⁃R2⁃L （Biotin）TCATCGTATAAACAGGAGCAGTTTCAGACAG
E⁃probe⁃L （FAM）CAGAGATGCATCCAGAGCAGTTCTGCGTTTT/idSp/T CACTGTTACAGCAGA（C3⁃spacer）

及昂贵的仪器，与其他检测技术如环介导等温扩增 用的RAA 荧光法及 RAA⁃LFD 法灵敏性均较高 ［22］ ，
反应（loop⁃mediated isothermal amplification，LAMP） 但与 LAMP 法相比，灵敏性较低 ［23］ ，原因可能是
等相比，可以大大缩短反应时间 ［17-21］ ，只需在恒温 LAMP法较多的引物对组成可以提高检测方法的灵
39 ℃条件下 16 min 即可完成检测。可适用于现场 敏性。特异性方面，几种检测方法均有较好的特异
快速检测，尤其在海关、机场及基层偏远地区，具有 性。RAA 荧光法及 RAA⁃LFD 法在灵敏性方面介于
较好的发展前景。 普通PCR方法与LAMP法，但检测时间更短，所需条
根据已有的研究，比较了本方法与其他检测方法 件更简便。
的灵敏性和特异性，与普通PCR方法相比，本研究采 本研究同时也具有一定局限性，首先，针对

A 阴性对照 1×10 拷贝数 1×10 拷贝数 B
0
1
1×10 拷贝数 1×10 拷贝数 1×10 拷贝数
3
4
2
1×10 拷贝数 1×10 拷贝数 1×10 拷贝数
6
7
5
50 000
40 000
（ mV ） 30 000 1×10 9 1×10 8 1×10 7 1×10 6 1×10 5 1×10 4 1×10 3 1×10 2 1×10 1 1×10 0 阴性对照
荧光值 20 000
10 000

0
0 2 4 6 8 10 12 14 16
时间（min）
A：RAA荧光法灵敏性检测结果；B：RAA⁃LFD法灵敏性检测结果。
图3 EHEC O157：H7灵敏性试验
Figure 3 Sensitivity test of EHEC O157：H7