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第42卷第9期           张馨予，颜月园，刘 刚，等. LC⁃MS/MS法同时测定大鼠血浆中来那度胺、伏立诺他和
                  2022年9月            地塞米松的浓度［J］. 南京医科大学学报（自然科学版），2022，42（09）：1240-1245                  ·1241 ·


                    来那度胺是一种免疫调节类的抗肿瘤药，可直                          司，美国），Oasis HLB 固相萃取柱（规格 60 mg，沃
                                                                                 ®
                                  ［1］
                接诱导肿瘤细胞凋亡 。来那度胺联合其他药物如                            特世公司，美国）。
                硼替佐米、沙利度胺等治疗肿瘤的临床试验也成为                            1.2  方法
                近年来国内外研究的热点            ［2-5］ 。地塞米松是临床上            1.2.1 仪器条件
                常用的一种糖皮质激素，临床上主要用于治疗过敏                                色 谱 柱 为 Agilent Zorbax Eclipse Plus C 18 柱
                                                      ［6］
                性皮炎、支气管哮喘和风湿性关节炎等疾病 。地塞                          （100 mm×2.1 mm，1.8 μm）；流动相为5 mmol/L乙酸
                米松常与其他药物联用治疗疾病 ，如地塞米松与来                           铵+0.1%甲酸水溶液⁃乙腈。梯度洗脱：0~1.5 min，
                                            ［7］
                那度胺的联合用药，临床上主要用于治疗多发性骨                            20%~30% 乙 腈 ；1.5~2.0 min ，30%~35% 乙 腈 ；
                髓瘤  ［8-11］ 。伏立诺他是一种新型分子靶向抗肿瘤药                     2.0~2.5 min，35% 乙 腈 ；系 统 平 衡 3 min；体 积 流
                物，通过抑制组蛋白去乙酰化酶的活性而使细胞周                            量 0.6 mL/min；柱温35 ℃；进样量5 μL。
                期停滞和/或细胞凋亡，它在骨癌的治疗中也受到重                               质谱采用电喷雾正离子源（ESI+源），多反应监
                视。研究表明，来那度胺、伏立诺他和地塞米松三                            测（multiple reaction monitoring，MRM）模式；驻留时
                者联合用药在治疗多发性骨髓瘤方面具有临床研                             间为100 ms。检测离子的质核和碰撞电压：来那度
                究价值   ［12-13］ ，因此同时监测来那度胺、伏立诺他和地                  胺 m/z 260→149，13 eV；地塞米松 m/z 393→355，
                塞米松的血药浓度对于三者的联合用药研究具有                             5 eV；伏立诺他m/z 265→232，13 eV；内标甲糖宁m/z
                重要意义。                                             271→155，37 eV。检测电压 3.5 kV；离子源温度

                    目前，研究人员多采用液相色谱法（liquid chro⁃                  120 ℃；锥孔电压 220 V；脱溶剂温度 350 ℃；脱溶剂
                matography，LC）、液相色谱⁃质谱联用法（liquid chro⁃            气体（N2 ）体积流量9 L/min。
                matography⁃mass spectrometry，LC⁃MS）测定来那度          1.2.2 溶液的制备
                胺、伏立诺他或地塞米松其中的一种                 ［14-18］ 或进行联         混合对照品溶液：分别取来那度胺、伏立诺他、
                合用药分析      ［4-5］ ，文献调研显示未发现同时定量大                  地塞米松对照品适量，精密称定，单独以甲醇溶解
                鼠血浆中来那度胺、伏立诺他和地塞米松的报道。                            来那度胺，以 70%甲醇溶解伏立诺他和地塞米松，
                近年来，因灵敏度高、稳定性好，LC⁃MS 法越来越多                        并定容，制成质量浓度分别为1.03、1.04、1.03 mg/mL
                地应用于药物分析领域，尤其是固相萃取及超高                             的对照品储备液；分别精密量取适量储备液于同一
                效色谱分离技术，使得高通量样品定量检测成为                             容量瓶中，以甲醇稀释至刻度，配制得系列混合对
                可能  ［19-20］ 。本研究建立了固液萃取法处理血液样                     照品工作液，低温避光保存。
                品，LC⁃MS/MS 法同时检测两种组分，定量限满足生                           内标工作液：取甲糖宁对照品 10 mg，精密称
                物微量含量分析，为来那度胺，伏立诺他、地塞米松                           定，置于10 mL 容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，
                的联合用药提供了重要研究基础。                                   摇匀，得质量浓度为1 mg/mL 的内标储备液。临用前
                                                                  将内标储备液用甲醇稀释成质量浓度为40 μg/mL 的
                1  材料和方法
                                                                  内标工作液。
                1.1  材料                                           1.2.3 动物实验
                    来那度胺（批号 20200516）、伏立诺他（批号                         8只雄性（190±25）g SD大鼠购自南京市青龙山
                20191116）、地塞米松（批号20191025），内标物甲糖                  实验动物养殖中心（SCXK 2008⁃0033）。大鼠适应
                宁（批号20191114），均由南京泽朗生物科技有限公                       环境饲养6 d，维持温度24~27 ℃，湿度（50 ± 10）%，
                司提供，对照品经HPLC 峰面积归一化法检测，质量                         实验前 12 h 停止进食，饮用水一直供饮，动物实验
                分数均在98.6%以上。甲醇（Merk公司，德国）、乙腈                      遵守相关动物管理准则，给药4 h后可进食。
               （国药集团）为色谱纯；超纯水经过Milli⁃Q系统纯化                            取来那度胺、伏立诺他、地塞米松对照品适量，精
                制备；其余试剂均为分析纯，购自北京国药集团。                            密称定，加0.5%甲基纤维素溶液制成三者质量浓度
                    安捷伦三重四级杆 1290 LC⁃6460 QQQ 串联质                 分别2.01、2.01、1.98 mg/mL的混合水悬液。
                谱仪（配有四元低压梯度泵和 MassHunter 工作站，                         灌胃前每只大鼠眼眶取无药空白血液用于标
                安捷伦公司，美国）、Eppendorf 5427 R低温高速离心                  准血浆样品及质控（quality control，QC）样品的制
                机（Eppendorf公司，德国），Mettler ME155DU 型十万             备。灌胃针给每只大鼠灌胃药物溶液（10 mL/kg），
                分之一电子分析天平（梅特勒⁃托利多仪器有限公                            灌胃后 10、20、30、45 min 及 1、2、3、5、12、18 h 时间
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