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第43卷第6期
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              COL1A1）及 RUNX2 表达水平更高。此外，Lu 等               ［18］  积也更显著。Morgan 等        ［23］ 从未成熟牛软骨中筛选
              用BMP⁃9+SRT2104处理C3H10T1/2细胞，在处理5、                 出关节软骨源性祖细胞，分别用 TGF 和 BMP⁃9 诱
              7 d 时 发 现 与 单 纯 使 用 BMP ⁃ 9 相 比 ，BMP ⁃ 9 +        导，发现 BMP⁃9 处理的祖细胞的 ACAN 和 COL2A1
              SRT2104 组的 OCN、COL1A1 及 RUNX2 表达水平明               基因表达分别比对照组高11倍和5倍，培养14 d后
              显增强，同时PCR检测结果也证实了这一结论。                            的基因表达定量分析也证实了这一点。由此可见，
                  BMP⁃9 可以促进间充质干细胞成骨分化，因此                       BMP⁃9 可以促进成软骨分化，但其诱导软骨形成的
              在骨组织工程、颅骨修复、骨缺损愈合中发挥重要                            机制目前尚不明确。
              作用。Freitas等   ［19］ 利用簇状规则间隔短回文重复序
                                                                4  BMP⁃9的特性
              列相关核酸酶 Cas⁃9（clustered regularly interspaced
              short palindromic repeats/associated nulease Cas ⁃ 9，  与其他BMP家族成员相比，BMP⁃9的成骨分化
              CRISPR⁃Cas9）技术对MSC进行基因编辑，使其过表                     能力最强。Bipin等      ［24］ 研究发现，在大鼠颅骨缺损模
              达 BMP⁃9，同时构建了大鼠颅骨缺损模型，结果显                         型中，使用甲基纤维素（MC）和海藻酸钙（Alg）的可
              示，BMP⁃9 组的 RUNX2、OSX、ALP 等成骨标志物基                  注射给药系统联合搭载不同剂量（0.5、1.5 μg）的
              因表达水平较对照组更高，同时注射后第21天时观                           rhBMP⁃2 或 rhBMP⁃9 的 凝 胶 系 统 ，相 同 剂 量 下 ，
              察到更强的细胞外基质矿化作用。显微 CT 结果显                          rhBMP⁃9组相比rhBMP⁃2组表现出更好的骨缺损修
              示，与对照组相比，BMP⁃9处理组的颅骨缺损处新骨                         复效果，同时还观察到 0.5 μg rhBMP⁃9 组骨缺损修
              形成更多。Wang 等       ［20］ 发现在体内，相比对照组，负              复效果弱于 1.5 μg rhBMP⁃9 组。Fujioka⁃Kobayashi
                                                                  ［25］
              载 BMP⁃9 和 P⁃15 肽水凝胶的聚乳酸⁃乙醇酸（poly⁃                 等 构建新西兰兔颅骨缺损模型，在该模型中通过脱
              lactic acid glycolic acid，PLGA）支架处理的MSC表达         蛋白牛骨骨粉搭载不同质量（5、20 μg）的rhBMP⁃2或
              更高水平的 ALP、RUNX2、OCN。这提示 BMP⁃9 能                   rhBMP⁃9，结果表明，5 μg rhBMP⁃9组表现出最佳的修
              更好地促进MSC的成骨分化。同时，该研究还观察                           复骨结构。相较于5 μg rhBMP⁃9组，20 μg rhBMP⁃2
              到在兔骨缺损模型中，BMP⁃9+P⁃15 肽水凝胶+                        组与 20 μg rhBMP⁃9 组的骨修复效果较差，而 5 μg
              PLGA 组的新骨形成更多。Shi 等           ［21］ 研究报道，联合        rhBMP⁃2组则不能完全修复骨缺损。
              应用生物活性玻璃（Bioglass）+BMP⁃9能够更好地促                         此外，不同于其他 BMP（如 BMP⁃2、BMP⁃4、
              进成骨分化。观察到在体内，相比单独使用 Bio⁃                          BMP⁃7），BMP⁃9不能被经典的BMP受体拮抗剂Nog⁃
              glass，BMP⁃9+Bioglass 组ALP活性更高，且在BMP⁃9             gin所抑制。据报道，Noggin抑制BMP信号通路的机
              存在的情况下，RUNX2、OSX 表达水平也显著上                         制是通过与 BMPRⅠ和 BMPRⅡ中的配体结构域结
              调。同时，在大鼠牙齿缺损模型中，也可以观测到                            合，从而阻碍 BMP 与其受体上的结合位点相结合。
              BMP⁃9+Bioglass组新骨形成更多。                            既往相关研究表明，Noggin 对 BMP⁃9 诱导的干细胞
                                                                成骨分化过程无明显影响             ［26］ 。研究发现，在 Noggin
              3  BMP⁃9的成软骨作用
                                                                存在的情况中，用BMP⁃2和BMP⁃9刺激肌肉前体细
                  BMP⁃9 具有介导软骨祖细胞（chondroprogeni⁃               胞系C2C12细胞，免疫荧光检测发现与BMP⁃2 处理
              tor，CPC）、MSC 等成软骨分化的潜能。Kawin 等              ［22］  组相比，BMP⁃9 处理组能够在细胞核中观察到更高
                                                                                 ［2］
              研究了 BMP⁃9 在 CPC 成软骨分化中的作用。该研                      水平的 Smad⁃1/5/8 。与此同时，测定 Smad⁃6/7 的
              究分别用 1⁃34 甲状旁腺激素（parathyroid hormone，             表达水平，发现 Noggin 存在时，与其他 BMP 相比，
              PTH）和BMP⁃9处理CPC，结果表明BMP⁃9组的成软                     BMP⁃9 更能诱导 Smad⁃6/7 的表达，这一结果表明

              骨标志物 SRY 相关的高迁移率族框⁃9（SRY⁃type                     BMP⁃9 不受 Noggin 抑制，且相比其他 BMP，能够更
              high⁃mobility⁃group box⁃9，SOX⁃9）、蛋白聚糖（aggre⁃      好地促进BMP⁃SMAD信号通路。此外，还发现BMP⁃9
              can，ACAN）、α1⁃Ⅱ型胶原（collagen type Ⅰ alpha 1，        刺激的 C2C12 细胞或小鼠胚胎成纤维细胞（mouse
              COL2A1）的mRNA表达水平，相比1⁃34PTH组升高，                    embryonic fibroblast，MEF）出现较多的异位骨形成，而
              其中以COL2A1最为明显。随后，通过阿尔新蓝、藏                         BMP⁃2、BMP⁃4、BMP⁃6、BMP⁃7刺激的细胞异位骨形
              红 O 染色和甲苯胺蓝染色测定糖胺聚糖沉积，研究                          成较少或可忽略，这也证实了Noggin 对除BMP⁃9以
              显示 BMP⁃9 组对糖胺聚糖表现出更大的摄取量。                         外的其他BMP家族蛋白有明显抑制作用。苏木精和
              同样，免疫组化分析也表明 BMP⁃9 组的 COL2A1 沉                    伊红染色结果表明，BMP⁃9能够在无或存在Noggin的
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