Page 25 - 南京医科大学学报自然科学版

第43卷第6期 夏芷晴，张紫晨，付 麒，等. 精氨酸代琥珀酸合成酶⁃1对胰岛β细胞增殖与凋亡的影响［J］.
2023年6月 南京医科大学学报（自然科学版），2023，43（6）：764-771 ·767 ·

A 1.5 B si⁃ASS1组 si⁃NC组 Blank组 D 4 E OE⁃ASS1组 Blank组
OE⁃NC组
mRNA相对表达量 1.0 β⁃actin 47 kDa mRNA相对表达量 3 2 *** β⁃actin 47 kDa
ASS1
ASS1
45 kDa
45 kDa
ASS1 0.5 *** C 1.0 ASS1 1 F 1.0 *
ASS1蛋白相对表达量 0.4 * ASS1蛋白相对表达量 0.4
0 0.8 0 0.8
Blank组 si⁃NC组 0.6 Blank组 OE⁃ASS1组 0.6
si⁃ASS1组
OE⁃NC组

0.2
0 0.2 0
si⁃ASS1组
Blank组 si⁃NC组 Blank组 OE⁃ASS1组
OE⁃NC组
***
A：qRT⁃PCR检测siRNA转染β⁃TC6细胞后ASS1 mRNA水平，与si⁃NC组比较， P < 0.001（n=3）；B、C：Western blot 检测siRNA转染β⁃TC6
细胞后ASS1蛋白表达水平（B）及半定量分析（C），与si⁃NC 组比较，P＜0.05（n=3）；D：qRT⁃PCR 检测慢病毒感染β⁃TC6细胞后ASS1 mRNA 水
*
***
平，与OE⁃NC 组比较， P < 0.001（n=3）；E、F：Western blot 检测慢病毒感染β⁃TC6细胞后ASS1蛋白表达水平（E）及半定量分析（F），与OE⁃NC
组比较，P＜0.05（n=3）。
*
图1 β⁃TC6细胞中ASS1敲低和过表达体系的构建及验证
Figure 1 Verification of ASS1 expression in β⁃TC6 cells after knockdown and overexpression of ASS1

A B
DAPI EdU Merge
50
（ % ） 40
Blank组 EdU阳性细胞率 30 *

20
10
0
si⁃ASS1组
Blank组 si⁃NC组
A si⁃NC组 C 1.5

相对细胞增殖比 1.0 **

0.5
si⁃ASS1组 0

si⁃ASS1组
Blank组 si⁃NC组
A：EdU检测胰岛β细胞增殖代表图片（×400）；B：EdU阳性细胞率比较，与si⁃NC组比较，P＜0.05（n=3）；C：CCK⁃8检测β⁃TC6细胞增殖活
*
力，与si⁃NC组比较，P < 0.01（n=3）。
**
图2 si⁃ASS1转染β⁃TC6细胞后细胞增殖变化
Figure 2 Proliferation changes of β⁃TC6 cells after si⁃ASS1 transfection

的具体靶点，进一步研究发现，与 si⁃NC 组比较，敲 Caspase途径，可能与AIF途径有关。

低 ASS1 后 β ⁃ TC6 细 胞 Bax/Bcl ⁃ 2 比 值 降 低（P < 2.5 ASS1 高表达对β⁃TC6 细胞中 mTOR 信号通路
0.001，图6A、B），cleaved Caspase⁃3/Caspase⁃3比值也 影响

降低（P < 0.01，图6C、D）。同时，与si⁃NC组比较，si⁃ 与 OE⁃NC 组比较，过表达 ASS1 后β⁃TC6 细胞
ASS1 组 AIF 的 mRNA 和蛋白水平增加（P＜0.01，图 Ki67 和 mTOR 的 mRNA 和蛋白水平均升高（P＜
6E~G）。下调 ASS1 增加β⁃TC6 细胞凋亡且不依赖 0.001，图 7）。上调 ASS1 促进β⁃TC6 细胞存活可能