Page 28 - 南京医科大学学报自然科学版

第43卷第6期
·770 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2023年6月

A B 3 C D
0 Bax/Bcl⁃2蛋白相对表达量 cleaved cleaved Caspase⁃3/Caspase⁃3
si⁃ASS1 si⁃NC Blank si⁃ASS1组 si⁃NC组 Blank组 2.0
Bax 21 kDa 2 Caspase⁃3 35 kDa 1.5
Bcl⁃2 26 kDa Caspase⁃3 17 kDa 蛋白相对表达量 1.0
β⁃actin 45 kDa 1 *** β⁃actin 45 kDa 0.5 **

0
Blank组 si⁃NC组 si⁃ASS1组 Blank组 si⁃NC组 si⁃ASS1组

E F G
8 *** si⁃ASS1组 si⁃NC组 Blank组 0.8
4 相对表达量 6 AIF 67 kDa 0.6 **

2 mRNA β⁃actin 45 kDa AIF蛋白相对表达量 0.4
0.2
AIF
0 0
Blank组 si⁃NC组 si⁃ASS1组 Blank组 si⁃NC组 si⁃ASS1组

A、B：Western blot 检测Bax和Bcl⁃2蛋白表达（A）及半定量分析（B）；与si⁃NC组比较， P < 0.001（n=3）；C、D：Western blot 检测β⁃TC6细胞
***
**
中Caspase⁃3和cleaved Caspase⁃3蛋白水平表达（C）及半定量分析（D），与si⁃NC组比较，P < 0.01（n=3）；E：各组AIF mRNA水平比较，与si⁃NC
组比较， P < 0.001（n=3）；F、G：Western blot检测各组AIF蛋白表达（F）及半定量分析（G），与si⁃NC组比较，P < 0.01（n=3）。
***
**
图6 si⁃ASS1转染β⁃TC6细胞后Bax/Bcl⁃2、cleaved Caspase⁃3/Caspase⁃3和AIF的表达变化
Figure 6 Expression changes of Bax/Bcl⁃2，cleaved Caspase⁃3/Caspase⁃3 and AIF in β⁃TC6 cells after si⁃ASS1 transfection

A Blank组 B C
OE⁃NC组
6 0.8 *** Blank组
OE⁃NC组 OE⁃ASS1组 Blank组
**** OE⁃ASS1组 Ki67 358 kDa 0.6 OE⁃NC组
mRNA相对表达量 4 2 *** mTOR 250 kDa 蛋白相对表达水平 0.4 ***
OE⁃ASS1组

0.2
0 β⁃actin 45 kDa 0
Ki67 mTOR Ki67 mTOR
A：Ki67 和 mTOR mRNA 水平比较，与 OE⁃NC 组比较， P < 0.001（n=3）；B、C：Western blot 检测 Ki67 和 mTOR 蛋白水平（B）及半定量分析
***
（C），与OE⁃NC组比较， P < 0.001（n=3）。
***
图7 ASS1过表达载体转染胰岛β细胞后Ki67和mTOR表达变化
Figure 7 Expression changes of Ki67 and mTOR in pancreatic islet β cells transfected with ASS1 overexpression vector

癌细胞增殖，而高表达ASS1可以通过激活mTOR信 AV/PI 法检测细胞凋亡情况，检测的是凋亡晚期细
号通路促进肿瘤细胞存活具有一致性 ［13］ 。此外，研 胞 ［18］ 。因此，敲低胰岛β细胞 ASS1 后，Caspase⁃3 活
究报道L⁃精氨酸可改善糖尿病鼠胰岛β细胞功能障 性降低可能是细胞凋亡的伴随现象。正常生理状
碍，促进胰岛β细胞恢复 ［14-15］ 。本研究仍需完善相关 态下 AIF 在线粒体内参与细胞的氧化磷酸化，当细
实验，明确精氨酸是否发挥作用。 胞受到特定损伤时，AIF 能够从线粒体转移到细胞
细胞亲凋亡蛋白Bax 和亲生存蛋白Bcl⁃2，这一 核内直接诱导DNA降解而使细胞凋亡 ［19-20］ 。本研究
对蛋白在线粒体介导的依赖 Caspase 凋亡通路中起 发现敲低胰岛β细胞ASS1后，AIF在mRNA水平和蛋
重要作用 ［16］ ，通常用Bax/Bcl⁃2的比值反映细胞凋亡 白水平的表达明显升高。因此，推测ASS1可能通过
［21］
的趋势。Caspase⁃3 是细胞凋亡经典信号通路的下 非经典Caspase途径介导了胰岛细胞凋亡的发生 ，
游执行分子，凋亡早期 Caspase⁃3 活性增加，凋亡晚 其中 AIF 可能发挥重要作用，但仍需要进一步研究
期 Caspase⁃3 活性降低 ［17］ 。本研究使用 TUNEL 和 进行验证。