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第43卷第7期 游铭钰，周 欢，张宇涵，等. hsa_circ_0005389在新生儿急性呼吸窘迫综合征细胞炎症模型
2023年7月 中的作用研究［J］. 南京医科大学学报（自然科学版），2023，43（07）：945-953 ·949 ·

2.3 敲低hsa_circ_0005389可降低炎症标志物的表达 （P < 0.001，图 3C），同时 TNF⁃α 蛋白表达量较阴性
转染 si ⁃ hsa_circ_0005389 后 hsa_circ_0005389 对照组明显降低（P < 0.001，图 3D）；如图 3E 所示，
表达降低，并且在LPS诱导的肺损伤A549细胞炎症 建立 A549 细胞肺损伤炎症模型（10 μg/cm LPS 作
2
模型中同样有效（P < 0.001，图3A、B）。与空白组及 用 48 h）后 ，与 NC + LPS 组 相 比 ，敲 低 hsa_circ_
阴性对照组相比，敲低 hsa_circ_0005389 表达后 0005389表达的干预组炎性标志物及相关通路指标
sTNFR1 mRNA下降最为明显，差异具有统计学意义 显著下降（P均 < 0.001）。

A B C 2.5 NC
1.5 1.5 si⁃hsa_circ_0005389
hsa_circ_0005389 相对表达量 1.0 *** hsa_circ_0005389 相对表达量 1.0 *** RNA相对表达量 1.0 ** *** *** **

0.5
0.5
0.5
0 0 0
NC+LPS si+LPS
NC si IL⁃6 IL⁃8 sTNFR1 PI3K Akt

D E
NC NC+LPS
NC si 1.5 si⁃hsa_circ_0005389 1.5 si⁃hsa_circ_0005389+LPS
蛋白相对表达量 ** ***
PI3K 110 kDa 1.0
TNF⁃α 17 kDa 1.0 ** RNA相对表达量 ***
IL⁃6 26 kDa 0.5 *** 0.5 *** *** ***
β⁃actin 42 kDa 0 0
PI3K TNF⁃α IL⁃6 IL⁃6 IL⁃8 sTNFR1 PI3K Akt
A：敲低hsa_circ_0005389后hsa_circ_0005389表达量；B：敲低hsa_circ_0005389后建立LPS诱导的肺损伤A549细胞炎症模型中hsa_circ_
0005389 表达量；C：敲低 hsa_circ_0005389 后 IL⁃6、IL⁃8、sTNFR1、PI3K、Akt 的 mRNA 表达量；D：敲低 hsa_circ_0005389 后 PI3K、TNF⁃α、IL⁃6 的
蛋白表达量。E：敲低 hsa_circ_0005389 后建立 LPS 诱导的肺损伤 A549 细胞炎症模型中 hsa_circ_0005389、PI3K、Akt、IL⁃6、IL⁃8、sTNFR1 的
mRNA表达量；两组比较，P < 0.05，P < 0.01， P < 0.001（n=3）。
*
***
**
图3 敲低hsa_circ_0005389后炎症标志物及相关通路指标的表达
Figure 3 The expression of inflammatory markers and related pathway indicators after hsa_circ_0005389 knockdown
2.4 敲低/过表达 hsa_circ_0005389 对 A549 细胞增 于阴性对照组，培养 2、3 d 的干预组表现出增殖抑
殖及凋亡的影响 制，差异具有统计学意义（P < 0.001，图4G）。与过表
与阴性对照组相比，敲低 hsa_circ_0005389 后 达 的 阴 性 对 照 的 凋 亡 率 相 比 ，过 表 达 hsa_circ_
A549细胞于2 d开始出现增殖加快，差异有统计学意 0005389 后凋亡率升高；同时在 LPS 诱导的肺损伤
义（P < 0.05，图4A）；而LPS诱导的肺损伤A549细胞 A549 细胞炎症模型中，相比于阴性对照组，过表达
炎症模型中，与阴性对照组相比，培养3 d的干预组 hsa_circ_0005389 后凋亡率进一步增加（P < 0.05，
表现出增殖加快，差异具有统计学意义（P < 0.001， 图 4H、I）。
图 4B）。同时，与阴性对照组的凋亡率相比，敲低
3 讨 论
hsa_circ_0005389表达的siRNA组的凋亡率降低；在
LPS诱导的肺损伤A549细胞炎症模型中，与阴性对 NARDS 是常发生于足月儿及晚期早产儿的一
照组的凋亡率相比，敲低 hsa_circ_0005389 表达的 种严重威胁生命的呼吸危重症，由宫内外多种因素
siRNA 组的凋亡率显著降低（P < 0.01，图 4C、D）。 引起 ［11-13］ ，本课题组在之前的研究中发现 hsa_circ_

过表达 hsa_circ_0005389 后 A549 细胞中 hsa_circ_ 0005389 在 NARDS 中位于上调 circRNA 表达谱前
0005389 的相对表达量升高（P < 0.001，图 4E）。相 列 ［10］ ，同 时 在 人 血 样 本 中 通 过 qPCR 分 析 表 明
对于阴性对照组，过表达 hsa_circ_0005389 后增殖 hsa_circ_0005389 在 NARDS 中表达增加。hsa_circ_
于2 d开始减慢，差异有统计学意义（P < 0.01，图4F）； 0005389 是 SLC38A10 pre⁃mRNA 反向剪接的产物，
在 LPS 诱导的肺损伤 A549 细胞炎症模型中，相比 它的功能以及在NARDS中发挥的作用尚不清楚。