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第43卷第7期 游铭钰，周 欢，张宇涵，等. hsa_circ_0005389在新生儿急性呼吸窘迫综合征细胞炎症模型
2023年7月 中的作用研究［J］. 南京医科大学学报（自然科学版），2023，43（07）：945-953 ·951 ·

现阶段，有文章指出 IL⁃6、IL⁃8、可溶性肿瘤坏 应 ［22⁃23］ ；同时，在敲低 hsa_circ_0005389 表达的 A549
死因子受体1（soluble tumor necrosis factor receptor 1， 细胞上建立急性肺损伤细胞炎症模型，每一个炎性
sTNFR1）为 ARDS 炎性标志物 ［11，14］ ；同时，在差异表 指标都出现明显降低，更进一步说明了 hsa_circ_
达的circRNA 的亲本基因谱的KEGG通路富集分析 0005389 与 炎 症 过 程 的 正 向 调 节 作 用 。 另 外 ，
（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，KEGG） hsa_circ_0005389的亲本基因溶质载体家族38成员
中有 PI3K/Akt 信号通路富集，另外也有文章指出 10（solute carrier family 38 member 10，SLC38A10）在
PI3K/Akt通路在LPS诱导的急性炎症反应中扮演重 垂体、肾上腺、胃和上消化道中表达，是一种氨基酸
要角色 ［15- 16］ ，故而研究中将 IL⁃6、IL⁃8、sTNFR1、 转运蛋白，可能参与内分泌代谢轴，对细胞的增殖、
PI3K、Akt、TNF⁃α作为NARDS炎性标志物。 新蛋白质的合成以及氧化应激起着支持作用 ［24-25］ 。
急性肺损伤 A549 细胞炎症模型的建立是研究 敲低 hsa_circ_0005389 表达的 A549 细胞的 CCK⁃8
基础，本研究采用 LPS 诱导的急性肺损伤细胞模 增殖及凋亡测定结果也证实 hsa_circ_0005389 具有
型。首先，LPS 暴露时间的确定：参考 Wang 等 ［17］ 抑 制 增 殖 与 促 进 凋 亡 的 功 能 。 同 时 过 表 达
的文章建立鼠模型时采用的是 48 h、转染后蛋白 hsa_circ_0005389的A549细胞CCK⁃8增殖及流式凋
表达含量改变时间、CCK⁃8 功能实验结果中细胞 亡测定结果进一步证实以上结果。上皮细胞的损
增殖开始出现差异的时间为 48 h。其次，LPS 暴露 伤修复能力关系到NARDS的严重程度，但是内源性
浓度的确定：研究中设置不同 LPS 暴露浓度梯度 修复机制被特异性抑制 ［11］ ，且启动修复过程对
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（0、5、10、15、20、25 μg/cm），观察 hsa_circ_0005389 NARDS 的 预 后 至 关 重 要 ［8］ 。 这 无 形 中 佐 证 了
与 NARDS 炎性标志物和相关通路指标的 mRNA 及 hsa_circ_0005389的促炎作用。
蛋白变化，最终建立LPS 诱导的急性肺损伤A549细 circRNA 被发现的作用机制有很多种，它可以
胞模型（10 μg/cm 作用 48 h）。 通过吸附miRNA 来调控下游mRNA，或者通过结合
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LPS诱导的急性肺损伤模型是研究中常见的诱 蛋白质来影响其功能，或者直接参与基因转录调控
导方式，多数研究选用小鼠/大鼠体内注射 LPS 建 发挥作用 ［26］ 。在以往相似的研究中，关于 circRNA
立急性肺损伤体内模型，其中有部分研究选用 LPS 发挥作用的机制有较为完善的探究，如 Lu 等 ［27］ 报
诱导的 A549 细胞系建立体外模型。Chen 等 ［18］ 在 道敲低 circ_0001679 通过调节 miR⁃12⁃338p/丝裂原
2022 年发表的文章中利用 LPS（200 ng/mL）2 h 诱导 活化蛋白激酶 1 来减轻肺损伤；Ke 等 ［28］ 研究表明
［19］
急性肺损伤；Ning等 研究中采用的细胞模型是A549 circRNA VMA21通过靶向microRNA⁃497⁃5p/CD2改
细胞系暴露于LPS（100 μg/mL）6 h后建立；在另外一 善化肺损伤。相比于此类研究，本研究存在两处不
篇研究报道中，使用 LPS 刺激（20 μg/mL）24 h 诱导 足：首先 hsa_circ_0005389 的下游靶基因以及作用
急性肺损伤 ［20］ 。以上研究中LPS使用的浓度和时间 通路尚未明确；其次，虽已证实过表达 hsa_circ_
都存在差异，与本研究采用的 LPS（10 μg/mL）48 h 0005389后对A549细胞增殖和凋亡的作用，但未能
也不相同，这可能与研究目的不同有关，另外即使 阐明相关炎症标志物表达的动态变化。
是相同的细胞系在不同生长环境中细胞状态也有 现有研究已经表明circRNA 在LPS诱导的急性
所不同，或者因为使用的LPS厂家和货号不同，药物 呼吸窘迫综合征 ［29］ 、急性肺损伤 ［30］ 、创伤性肺损
溶解和稀释时产生的误差等。NARDS 和新生儿急 伤 ［31］ 等肺损伤疾病中发挥作用，但在 NARDS 中，
性肺损伤具有性质相同的病理变化，且都是全身炎 本 研 究 基 于 前 期 研 究 ，第 一 次 阐 述 circRNA 在
症反应的肺部表现，因此本研究采用 LPS 诱导的急 NARDS 中的作用，在 NARDS 中首次检测出差异表
性肺损伤模型作为体外研究的细胞炎症模型。 达的circRNA表达谱。在成人肺损伤疾病中，circRNA
敲 低 hsa_circ_0005389 表 达 的 A549 细 胞 中 可作为诊断或者疾病预后的潜在生物标志 ［32-33］ ，
sTNFR1 mRNA 相对表达量及TNF⁃α 蛋白表达量显 在 NARDS 中，hsa_circ_0005389 可能作为潜在生物
著降低。sTNFR1是TNFR1胞外域的蛋白水解裂解 标志预测疾病预后或者作为诊断标准。另外先前
（脱落）产生的仍然能够与 TNF⁃α 结合的同源可溶 研究表明 miRNA 在 ALI 的发展和治疗中发挥着重
性受体，与TNF⁃α在炎症中均有着不可或缺的作用， 要作用，circRNA 作为 miRNA 的海绵提供了一种新
其表达水平与炎症的程度存在相关关系 ［21］ ，有文章 的治疗思路，目前关于在急性呼吸窘迫综合征/急性
指出抗sTNFR1药物治疗可抑制肺损伤中的炎症反 肺损伤 ［29，34］ 中 circRNA 的作用机制已有初步研究，