Page 8 - 南京医科大学自然版

第44卷第5期
·596 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2024年5月

inflammasomes，decreased phosphorylation levels of NLRC4，and reduced cleavage of Caspase ⁃ 1 and GSDMD. There was an
interaction between TBK1 and NLRC4，and the N⁃terminal of TBK1 interaced with the NACHT domain of NLRC4. TBK1 and NLRC4
had spatial co⁃localization. TBK1 phosphorylated the NLRC4 Ser533 site. S.T animal model experiments showed that inhibiting TBK1
activity significantly improved the survival rate of mice，weakened the bacterial load in the peritoneal cavity⁃flushed fluid and lung
tissues of mice，reduced the content of IL⁃1β and TNF⁃α in serum and peritoneal cavity⁃flushed fluid，and reduced the proportion of
neutrophils in peritoneal cavity⁃flushed fluid. Conclusion：TBK1 interacts with NLRC4，phosphorylates the NLRC4 Ser533 site，and
promotes the activation of NLRC4 inflammasome，which providing a theoretical basis and new potential targets for treating related
diseases.
［Key words］ NLRC4 inflammasome；TBK1；Salmonella typhimurium
［J Nanjing Med Univ，2024，44（05）：595⁃603，614］

炎症小体是由多种蛋白质组成的复合体，是天 功能的深入研究，TBK1已成为治疗炎症性疾病、自身
然免疫系统的重要组成部分 ［1-2］ 。其中核苷结合寡 免疫性疾病、癌症、代谢性疾病和神经退行性疾病的

聚化结构域样受体 4（nucleotide⁃binding oligomeriza⁃ 潜在靶点 ［11-13］ 。由此可见，TBK1是多种炎症途径和
tion domain⁃like receptor 4，NLRC4）作为最重要的炎 多种干扰素诱导途径的交叉点 ［14］ 。最近有研究表
症小体之一，能够感知一系列胞内细菌的感染，在 明TBK1可以参与调节NOD样受体热蛋白结构域相
［3］
先天免疫反应中发挥关键作用 。当宿主细胞受到 关蛋白 3（NOD⁃like receptor thermal protein domain
鼠伤寒沙门氏菌感染之后，该菌利用其 3 型分泌系 associated protein 3，NLRP3）炎症小体的激活 ［9，15］ 。
统（type 3 secretion system，T3SS）将杆状蛋白（Prgj） 本 研 究 利 用 鼠 伤 寒 沙 门 氏 菌（ Salmonella
以及鞭毛蛋白（Flagellin，FLIC）释放到胞内，与核苷 typhimurium，S.T）处理永生化骨髓巨噬细胞（immor⁃
酸结合富含亮氨酸重复受体（nucleotide⁃binding leu⁃ talized bone marrow⁃derived macrophage，IBMDM），构
cine⁃rich repeat⁃containing receptor，NLR）家族凋亡 建 NLRC4 炎症小体急性炎症感染模型，通过抑制
抑制蛋白（NLR family of apoptosis inhibitory protein， TBK1的表达及功能以观察TBK1在NLRC4炎症小体
NAIP）相互作用并激活它们。诱导NAIP⁃NLRC4炎症 信号通路中的作用。
小体的组装，激活Caspase⁃1，促进白细胞介素（inter⁃
1 材料和方法
leukin，IL）⁃1β以及 IL⁃18 的成熟，同时剪切 Gasder⁃
min D（GSDMD）介导细胞焦亡 ［4-5］ 。与 NLR 家族蛋 1.1 材料
白成员一样，NLRC4具有典型的3种结构域，包括 N 胰蛋白胨、酵母提取物（Oxiod 公司，美国）；琼
末端半胱天冬酶激活和募集结构域（Caspase⁃acti⁃ 脂粉（北京 Solarbio 公司）；氨苄青霉素（Sigma 公司，
vation and recruitment domain，CARD）、中央 NACHT 美国）；TBK1 抑制剂 GSK8612（Med ChemExpress 公
核苷酸结合结构域和 C 末端富含亮氨酸重复序列 司，美国），TBK1抑制剂氨来呫诺（Amlexanox，AML）
［6］
（Leucine⁃rich repeat，LRR）结构域 。NLRC4 炎症 （Abcam 公司，美国）；DSS交联剂（MCE公司，美国），
小体的激活需要NAIP蛋白参与，其可以感知胞质中 DMEM、RPMI1640培养基（Gibco公司，美国）；TMD显
的细菌成分。虽然NLRC4炎症小体的特异性配体已 色试剂、小鼠肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor，
经有大量研究，但是NAIP⁃NLRC4炎症小体组装的上 TNF）⁃α ELISA 试剂盒、小鼠 IL⁃1β ELISA 试剂盒
游调节因子仍不明确。 （BD Biosciences 公司，美国），胶回收试剂盒（Omega
TANK 结 合 激 酶 1（TANK ⁃ binding kinase 1， Biotek公司，美国），质粒小提试剂盒（南京诺唯赞生
TBK1）首先被鉴定为与小鼠中的 TANK 相互作用 物科技有限公司），乳酸脱氢酶（lactate dehydroge⁃
［7］
的蛋白 ，其不仅在核因子κB（nuclear factor⁃kappa B， nase，LDH）检测试剂盒（上海碧云天生物技术公司）。
NF⁃κB）介导的应答中起作用，还在干扰素调节因子 Anti⁃NLRC4、Anti⁃p⁃NLRC4、Anti⁃GSDMD、Anti⁃
（interferon regulatory factor，IRF）的激活中发挥重要 Myc、Anti⁃Flag（Abcam公司，美国），Anti⁃凋亡相关斑
作用 。事实上，TBK1已被证明在炎症和自噬等多 点 样 蛋 白（apoptosis ⁃ associated speck ⁃ like protein
［8］
种细胞通路中具有关键作用 ［9-10］ 。随着对其结构及 containing a CARD，ASC）（Santa Cruz 公司，美国），