Page 96 - 南京医科大学自然版

第44卷第8期
·1124 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2024年8月

A 4 weeks after immunization B 6 weeks after immunization
2.8 2.4
Low Low
nm） 2.4 Mid nm） 2.0 Mid
2.0
1.6
High
High
（450 1.6 NC （450 D 1.2 NC
1.2
0.8
D
0.8
0.4 0.4
0 0
1 ∶ 80 000
1 ∶ 20 000
1 ∶ 1 280 000
1 ∶ 320 000
1 ∶ 1 280 000
1 ∶ 20 000
1 ∶ 10 000 1 ∶ 40 000 1 ∶ 160 000 1 ∶ 640 000 1 ∶ 10 000 1 ∶ 40 000 1 ∶ 160 000 1 ∶ 640 000
1 ∶ 320 000
1 ∶ 80 000
C 8 weeks after immunization D 10 weeks after immunization
3.2 2.4
2.8 Low Low
nm） 2.4 Mid nm） 2.0 Mid
1.6
High
High
2.0
（450 D 1.2 NC （450 1.2 NC
1.6
0.8
0.8 D
0.4
0.4
0 0
1 ∶ 320 000
1 ∶ 80 000
1 ∶ 1 280 000
1 ∶ 80 000
1 ∶ 20 000
1 ∶ 320 000
1 ∶ 1 280 000
1 ∶ 20 000
1 ∶ 10 000 1 ∶ 40 000 1 ∶ 160 000 1 ∶ 640 000 1 ∶ 10 000 1 ∶ 40 000 1 ∶ 160 000 1 ∶ 640 000
A：ELISA analysis of the level of anti⁃Gn antibodies in serum at 4 weeks after immunization. Gn protein expressed in insect cells was used as sub⁃
strate. B-D：The expression of anti⁃Gn antibodies titer in serum at 6（B），8（C），10 weeks（D）after immunization. Low：mice immunized with 2 μg Gn⁃
mRNA；Mid：mice immunized with 5 μg Gn⁃mRNA；High：mice immunized with 10 μg Gn⁃mRNA；NC：negative control.
图4 ELISA检测不同时间点小鼠血清中的抗体水平
Figure 4 Analysis of the expression levels of antibodies in mice serum at different time points by ELISA
25 *** 建了一种具有复制能力的以重组水疱性口炎病毒
***
（rVSV）载体表达 DBV Gn/Gc 的减毒活疫苗，作为一
20
种 DBV 候选疫苗，它可以在免疫功能正常者和免疫
（×10 5 ） 15 功能不全的 IFNAR 小鼠中诱导广谱中和抗体。
-/-
Kwak等 通过对编码 DBV 蛋白的候选 DNA 疫苗的
［16］
TCID50 10 研究，发现雪貂接种编码 DBV蛋白的 DNA 疫苗后，
再感染 DBV全部存活，并且没有出现任何临床症状。
5
mRNA疫苗是一种作为蛋白质翻译模板的单核
0 苷酸序列，在传染病的防治中得到了较为广泛的应
DBV+serum （1 ∶ 10） 用。与减毒活疫苗和 DNA 疫苗等传统疫苗相比，
DBV+serum （1 ∶ 100）
DBV
The DBV virus infected Vero cells for 24 h after incubation with mRNA 疫苗以 IVT mRNA 为主要成分，排除了在传
统疫苗中的常见内毒素和其他感染风险，特别是新
different dilution（1∶10 and 1∶100）of serum，MOI=0.01. The virus
冠病毒mRNA 疫苗的快速开发和应用，为传染病的
***
titers were measured by qPCR， P < 0.001. TCID50：50% tissue cul⁃
防控提供了很好的思路。因此本研究基于 mRNA
ture infective dose.
图5 qPCR测定不同处理组的病毒滴度 疫苗设计策略，通过抗原序列分析，选择特异性抗
Figure 5 Virus titers in different treatment groups were 原表位 Gn 为研究对象，优化合成 Gn 全基因序列并
measured by qPCR 克隆至表达载体 pGEM⁃3Zf（+）中，通过酶切鉴定和
基因测序，确定mRNA 模板构建成功。为了验证质
在我国分布广泛，且流行地区多为乡村地区，给 粒模板的体外转录能力，使用 BamHⅠ酶切使质粒
SFTS的防治带来了困难。 线性化后，通过加帽和添加 poly⁃A 尾处理，700 ng
目前 SFTS 尚无特异性治疗方案和有效的疫 RNA体外转录获得12.9 μg mRNA，同时瞬时转染真
苗。在 DBV 病毒感染疫苗研究方面，Dong 等 ［15］ 构 核细胞，Western blot 鉴定 Gn 蛋白能够在细胞中表