Page 50 - 南京医科大学学报自然科学版

第41卷第12期
·1756 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2021年12月

PAGE凝胶电泳检测，显示抗体轻、重链大小符合预 断减小。该实验证明，抗F1嵌合抗体能够与鼠源抗
期，且浓度较高（图5）。 体竞争结合F1抗原上的相同表位。

1.4
1.0
4C6嵌合抗体
阴性对照
0.8
1.3
nm ） nm ） 0.6
（ 450 1.2 （ 450
D
D 0.4
1.1
0.2

1.0 0
1 2 3 4 5 6
细胞株 1 ∶ 200 1 ∶ 400 1 ∶ 800 1 ∶ 1 600 1 ∶ 3 200 1 ∶ 6 400
图4 6株细胞培养10代后培养液ELISA检测 1 ∶ 12 800 1 ∶ 25 600 1 ∶ 51 200
Figure 4 Culture medium after 10 generations of 6 cell 稀释度
lines detected by ELISA 图6 抗体间接ELISA检测
Figure 6 Indirect ELISA detection of antibodies
M 1
kDa

1.0
70
←57.13 kDa
55 nm ）
40 （ 450 0.5
D
35
←32.32 kDa
25 0
1 ∶ 12 800
1 ∶ 50 1 ∶ 100 1 ∶ 200 1 ∶ 400 1 ∶ 800 1 ∶ 1 600 1 ∶ 3 200 1 ∶ 6 400 1 ∶ 25 600
1：嵌合抗体；M：Protein Ladder。
稀释度
图5 抗体的SDS⁃PAGE分析 图7 嵌合抗体与鼠源抗体竞争性ELISA检测
Figure 5 SDS⁃PAGE analysis of antibody Figure 7 Competitive ELISA detection of human chime⁃
ric antibody and mouse antibody
2.4 抗体分析
2.4.1 间接ELISA检测 2.4.3 亲和力检测
将抗体从1∶200稀释度开始稀释，加入含F1抗 两种抗体进样后分析其亲和力，嵌合抗体及鼠源
原的酶标板中进行 ELISA 检测。结果显示，抗体稀 抗体的平衡解离常数KD值分别为2.303×10 mol/L
-9
释度在 1∶400 以上时，D（450 nm）值与抗体浓度呈 与1.830×10 mol/L，两种抗体与F1抗原均有较高的
-9
正相关，结果提示，嵌合抗体与F1抗原特异性结合， 亲和力（图8、9）。
D（450 nm）值与抗体浓度呈正相关（图6）。 2.4.4 免疫共沉淀与质谱分析

2.4.2 竞争性ELISA 免疫共沉淀后的样本，经 SDS⁃PAGE 电泳和考
将抗 F1 鼠源抗体加入带有 F1 抗原的酶标板 马斯亮蓝染色后，于 15 kDa 左右发现目的条带（图
中，随后加入人源化的嵌合抗体与其竞争结合F1抗 10），其大小与F1抗原一致，切胶回收后进行质谱分
原。当嵌合抗体稀释度为1∶50时，D（450 nm）值接 析，该蛋白为鼠疫F1抗原（图11）。
近间接ELISA实验中嵌合抗体饱和时D（450 nm）值
3 讨 论
（图7）。该结果提示，当嵌合抗体稀释度为1∶50时，
酶标板上 F1 结合位点大部分结合嵌合抗体。随着 人源化抗体常分为嵌合抗体、表面重塑抗体及改
嵌合抗体的浓度逐渐降低，D（450 nm）值也随之不 型抗体3类，其中嵌合抗体是利用DNA重组技术，将