Page 30 - 南京医科大学学报自然科学版
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第42卷第10期
               ·1372 ·                           南 京    医 科 大 学 学         报                        2022年10月


              BALF，levels of total serum IgE and BALF IL⁃4 and IL⁃13，and TSLP expression in the lung were significantly increased in the asthma
              group（P < 0.05）. As compared with the asthma group，all the above indices mentioned in the puerarin group and the budesonide group
              were decreased significantly（P < 0.05）. Conclusion：Puerarin alleviates the airway inflammation，hyperresponsiveness，and Th2
              immunity by down⁃regulating the expression levels of TSLP in a chronic experimental asthma.
             ［Key words］ puerarin；asthma；airway inflammation；Th2 immunity；thymic stromal lymphopoietin
                                                                      ［J Nanjing Med Univ，2022，42（10）：1371⁃1375，1408］





                  支气管哮喘（哮喘）是多基因参与的具有遗传                          号：SYXK（苏）2013⁃0016］。该方案经南京医科大学
              易感性的慢性气道炎症性疾病，其发病涉及多种炎                            动物实验伦理委员会批准，实验动物在麻醉下进行
              症细胞、炎性介质和复杂的细胞因子网络，以血清                            所有手术，并尽一切努力最大限度减少其疼痛、痛
              IgE 增高、肺组织嗜酸性粒细胞（eosnophils，EOS）浸                 苦和死亡。葛根素（南京中医药大学心血管药理实
                                                ［1］
              润和气道高反应性为显著的临床特征 。来源于上                            验室提供）；吸入性布地奈德混悬液（Astra Zeneca
              皮细胞的胸腺基质淋巴细胞生成素（thymic stromal                    公司，英国）；TSLP多克隆抗体（Abcam公司，美国）；
              lymphopoietin，TSLP）在哮喘患者体内高表达 ，并                  IL⁃4 和 IL⁃13 ELISA 试剂盒（R&D 公司，美国）；IgE
                                                       ［2］
              在Th1/Th2免疫失衡中起重要作用。哮喘患者气道                         ELISA试剂盒（BPB公司，美国）；β⁃actin多克隆抗体
              活检显示，TSLP和Th2细胞因子在哮喘患者气道上                         （南京凯基生物公司）。小鼠肺功能仪（北京鑫澳成
              皮细胞和固有层高表达，尤其见于气道阻塞性疾病                            科技有限公司）；低温高速离心机（Eppendorf 公司，
              病情较重的患者 。原位杂交发现 TSLP 在哮喘气                         德国）；勃林格殷格翰超声雾化器（南京道森科技有
                             ［3］
              道高表达，与疾病的严重程度和 Th2 炎症趋化因子                         限公司）；自制小鼠雾化吸入箱。
              表达密切相关 。上皮源性 TSLP 在变应性哮喘的                         1.2  方法
                           ［9］
              发生发展中起着重要作用            ［4-5］ 。TSLP基因多态性与          1.2.1  动物分组和哮喘模型建立
              哮喘和过敏症相关联。靶向抑制 TSLP 信号通路有                              BALB/c雌性小鼠随机分为4组，每组8只，即正
                              ［4］
              助于阻断哮喘发展 。                                        常组、哮喘组、葛根素组和布地奈德组。模型建立
                  葛根素是从豆科植物葛根的根部提取的一种                           参照文献的方法 。布地奈德组雾化吸入布地奈德
                                                                               ［8］
              异黄酮，它的主要化学成分为4，7⁃二羟基⁃8甲⁃D葡                        混 悬 液 6 mL，30 min 后 予 卵 白 蛋 白（ovabumin，
              萄糖基异黄酮，是葛根中含量较多的异黄酮之一。                            OVA）雾化。正常组予生理盐水腹腔注射及雾化。
              葛根素作为一种中草药，据《神农本草经》记载，有                           葛根素组激发前 30 min 给予 50 mg/kg 葛根素溶液
              解肌退热、透发麻疹、生津止渴、升阳止泻等功效。                           （溶解于生理盐水）灌胃，每天 1 次，连续 9 d。正常
              葛根素已用于治疗多种疾病，具有保护神经、降糖、                           组和哮喘组分别在激发前 30 min 给予腹腔注射 1%
              抗氧化应激、抗过敏、改善血循环及抗骨质疏松作                            DMSO。
              用 。近来，国内学者研究发现葛根素可以通过抑                            1.2.2  呼气阻力测定
                ［6］
              制核因子（nuclear factor，NF）⁃κB、肿瘤坏死因子                      小鼠最后次雾化24 h后，在戊巴比妥钠70 mg/kg
             （tumor necrosis factor，TNF）⁃α信号通路减轻抗原诱             麻醉下行气管插管，设置呼吸机潮气量 6 mL/kg，呼
              导的气道炎症和气道高反应性 。本研究通过建立                            吸频率为 90 次/min，吸呼比为 1∶1。静注氯化乙酰
                                         ［7］
              哮喘小鼠模型，观察葛根素对气道炎症、气道高反                            胆 碱（ACh，剂 量 分 别 为 10、30、90、270 μg/kg，泵
              应性和Th2免疫以及TSLP表达的影响，旨在从分子                         入），连续记录激发前、后的呼气阻力（Re）值。
              水平探讨葛根素治疗哮喘的可能作用机制。                               1.2.3  酶联免疫吸附实验
                                                                     OVA末次激发24 h后，处死小鼠，立即摘眼球取
              1  材料和方法
                                                                血，4 ℃、4 000 r/min离心15 min获取血清。用1 mL
              1.1  材料                                           PBS液行支气管肺泡灌洗，回收率均 > 85％。BALF
                  6~8 周龄 SPF 级 BALB/c 雌性小鼠 32 只，体重              4 ℃、1 500 r/min 离心 10 min，收集上清。ELISA 法
             （20±2）g，购自北京维通利华实验动物有限公司，交                         检测血清总IgE、BALF液中白介素（interleukin，IL）⁃4
              由南京医科大学动物实验中心饲养［动物许可证编                            和 IL⁃13 含量，具体步骤按试剂盒说明书进行。在
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