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第42卷第12期
               ·1682 ·                           南 京    医 科 大 学 学         报                        2022年12月


              positively correlated with the expression levels of multiple immune checkpoints，which may be a critical regulatory factor for the
              oncogenesis，progression and immune evasion in pancreatic cancer.
             ［Key words］ DAAM1；DAAM2；pancreatic cancer；prognosis；immune checkpoint
                                                                           ［J Nanjing Med Univ，2022，42（12）：1681⁃1686］





                  胰腺癌是一种恶性程度高、诊断和治疗较为困                          物科技有限公司）。HPanA120Su02 芯片包含 66 例
              难的消化系统常见恶性肿瘤。2020年世界范围内有                          癌及 54 例癌旁样本。组织芯片的使用由上海芯超
                                                      ［1］
              超过40万人死于胰腺癌，5年总生存率仅约9% 。近                         生物科技有限公司临床研究伦理委员会批准通过
              年来，胰腺癌的发病率和病死率显著增加 。根据                            （审批编号：YBM⁃05⁃02）。
                                                    ［2］
              美国癌症协会发布的最新统计数据，到 2020 年，美                        1.2  方法
              国有约57 600例新发胰腺癌病例和近50 000例死亡                      1.2.1 免疫组化染色
              病例 。在中国，胰腺癌的发病率逐年上升，在男性                                取胰腺癌组织芯片进行免疫组化（immuno⁃
                  ［2］
              中已成为排名第7位的恶性肿瘤，且其病死率在全人                           chemistry，IHC）染色。过程如下：按常规方法进行
                                            ［3］
              群肿瘤相关死亡中同样排名第7位 。尽管治疗策略                           脱蜡，水合，将切片用二甲苯浸泡5 min，更换二甲苯
              不断发展，靶向治疗、免疫治疗逐渐走进肿瘤治疗                            后再浸泡 5 min。分别在无水乙醇中浸泡 5 min、
              领域 ，但胰腺癌的预后仍未得到显著改善。因此，                           95%乙醇中浸泡 5 min、85%乙醇中浸泡 5 min、70%
                  ［4］
              进一步探究胰腺癌发生、发展的分子机制及寻找新                            乙醇中浸泡 5 min，PBS 浸洗 3 min×3 次。柠檬酸钠
              的治疗靶点和生物标志物对胰腺癌的防治有非常                             缓冲液抗原修复，滴 3%H2O2⁃甲醇溶液灭活内源性
              重要的意义。                                            过 氧 化 物 酶 ，1% BSA 工 作 液 封 闭 ，滴 加 一 抗
                  蓬乱蛋白相关形态形成活化因子（dishevelled⁃                   （DAAM1：1∶200稀释，武汉三鹰生物技术有限公司；
              associated activator of morphogenesis，DAAM）是形成    DAAM2：1∶50 稀释，武汉三鹰生物技术有限公司）。
              素 蛋 白 的 亚 类 ，共 包 括 2 个 家 族 成 员 ，分 别 为             4 ℃孵育过夜，PBS缓冲液冲洗3次，滴加二抗，37 ℃
              DAAM1及DAAM2。既往研究表明，DAAM家族成员                       孵育 30 min，PBS 缓冲液冲洗 3 次。DAB 反应染色，
              在恶性肿瘤发生、发展中起重要作用。DAAM1在乳                          冲洗后苏木精复染，干燥封片检测。用 Aperio 病理
              腺癌  ［5-6］ 、胶质瘤 中响应分泌蛋白Wnt5a的刺激，并                  扫描程序对染色的切片进行扫描拍照。
                            ［7］
              诱发下游小G蛋白RhoA的活化，从而增强肿瘤细胞                          1.2.2 免疫组化结果判读
              的迁移和侵袭能力。DAAM2可驱动泛素连接酶E3                               由专业病理分析人员在 HALO 程序辅助下采
              基因VHL（Von Hippel⁃Landau）的降解进而上调缺氧                 用 12 分制独立对 DAAM1 及 DAAM2 染色结果进行
              诱导因子1α（hypoxia⁃inducible factor 1α，HIF⁃1α）的表      半定量分析，将染色阳性细胞百分比评为 0~4 分：
              达，促进胶质瘤、肝癌的进展           ［8-9］ 。然而，目前为止尚无          0（<5%）、1（6%~25%）、2（26%~50%）、3（51%~75%）
              关于DAAM家族成员在胰腺癌中的研究报道。                             和 4（>75%），将染色强度评为 0~3 分：0（阴性）、
                  癌症基因组图谱（the Cancer Genome Atlas，TCGA）         1（弱）、2（中）、3（强）。免疫反应性评分（immunore⁃
              提供了共33种肿瘤的高通量检测数据。近年来，基                           activity score，IRS）为阳性细胞的百分比评分和染色
              于TCGA数据库的分析很大程度上助力了肿瘤标志                           强度评分的乘积。
              物的研究    ［10-11］ 。本研究通过TCGA 数据挖掘及免疫                1.2.3 癌症基因组图谱数据下载与分析
              组化染色，分析DAAM1和DAAM2在胰腺癌样本中                              从 UCSC Xena（https：//xenabrowser.net/datapag⁃
              的表达及其临床价值，并率先探究了DAAM 家族与                          es/）下载TCGA数据库胰腺癌RNA测序数据。基因
              免疫检查点的关系，提示DAAM 家族可能是调控胰                          表达采用log2 （x+1）标准化的RSEM形式表示。提取
              腺癌免疫逃避的关键因素。                                      DAAM1、DAAM2、PDL1、PDL2、CD80、CD86 等基因
                                                                表达数据。
              1  对象和方法
                                                                1.3 统计学方法
              1.1  对象                                                本研究所涉及的数据分析均采用 SPSS 26.0 软
                  胰腺癌组织芯片（HPanA120Su02，上海芯超生                    件进行；部分生物信息学分析和图像可视化采用 R
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