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第45卷第2期             成治纬，卫昕怡，王婉莹，等. 化妆品中3种常见抗生素的一种快速检测方法［J］.
                  2025年2月                     南京医科大学学报（自然科学版），2025，45（2）：233-239                        ·235 ·


                菌，以进行化妆品中常见的3种抗生素的检测。                             关系的曲线。
                1.2.3  中和剂的中和效果验证                                 1.2.5  抗生素抑菌效果测定
                    化妆品样品的处理：取市售未拆封化妆品20件                             实验组取 0.5 g 不同浓度的抗生素加标样液加
               （液体类10件、霜膏乳类6件、贴膜类4件，均为水溶                          入 4.5 mL 中和剂（根据 1.2.3 的实验结果，选取中和
                性），称取化妆品样品 1 g，分别加入 9 mL 灭菌生理                     效果最好的中和剂），分别接种1 mL金葡菌悬液（菌
                盐水、营养肉汤、SCDLP液体培养基、MLEB 4种稀释                      液浓度约为 1×10 cfu/mL），37 ℃下培养 45 min 和
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                液，振荡混匀后，静置 15 min，经 0.22 μm 微孔滤膜                  90 min 时，使用紫外可见分光光度计测定溶液吸光
                过滤，得化妆品样品待检液。                                     度，每个样品测定 3 次，取其平均值；空白组取 0.5 g
                    金葡菌菌液的制备：取于-40 ℃保存的金葡菌                        灭菌生理盐水替代抗生素溶液，其余按实验组操
                冻存液，室温解冻，用无菌接种环蘸取一环菌液，划                           作。计算各浓度抗生素的细菌回收率=（实验组吸光
                线于冷却的营养琼脂平板，将培养皿倒置放入恒温                            度/空白组吸光度）×100%。以上实验步骤重复3次，
                培养箱中，37 ℃孵育 24 h 后，挑取适量营养琼脂平                      细菌回收率取3次实验的平均值。
                板中的金葡菌菌落，溶解于 0.9%灭菌生理盐水中，                         1.2.6  实际样品检测
                振荡摇匀，参照麦氏比浊管，用灭菌生理盐水进行                                根据1.2.5的实验结果，选取一定浓度下合适的
                梯度稀释，并通过营养琼脂平板培养验证，菌液浓                            细菌回收率作为标准回收率，建立实际化妆品样
                度约为1×10 cfu/mL。                                   品的检测标准。取市售未开封化妆品 6 件（液体类
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                    参考《中国药典》2020年版中的相关方法对4种                       4 件、贴膜类2件），经本研究建立的检测方法进行检
                稀释液进行微生物计数法适用性检测。计数实验                             测。另取未检出抗生素的市售化妆品进行氧氟沙
                组：取 9 mL 化妆品样品待检液和 1 mL 金葡菌菌液                     星、氯霉素和头孢克肟 3 种抗生素的加标检测。化
                于灭菌试管中（使溶液细菌浓度<100 cfu/mL），充分                     妆品样品的处理同 1.2.1 中化妆品标准处理液的方
                混匀后取1 mL注入营养琼脂平板，平行制备2个平                          法。计数实验组：取0.5 g化妆品样品和4.5 mL中和
                板，37 ℃培养24 h后进行平板计数，菌落数记作N1；                      剂于试管中，振荡均匀后经0.22 μm微孔滤膜过滤，
                计数对照组：取相应稀释液替代化妆品待检液，其                            得样品待检液，以样品待检液∶菌液=5∶1的比例接种
                余按计数对照组操作，菌落数计作 N2；待检液对照                          1 mL 金葡菌悬液（菌液浓度约为 1×10 cfu/mL），于
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                组：取相应稀释液替代菌液，其余按计数对照组操                            37 ℃下培养45 min和90 min后，使用紫外可见分光光
                作，菌落数记作N0；无菌对照组：取1 mL稀释液注入                        度计测定溶液吸光度，每个样品测定3次，取其平均
                营养琼脂平板，37 ℃培养24 h后计数。计算各稀释                        值，记作A 样品；计数对照组：用灭菌生理盐水替代化妆
                液的细菌回收率（W）=［（N1-N0）/N2］×100%，选取回                  品样品，其余按计数实验组操作，吸光度记作A 对照。
                收率较高的稀释液作为中和剂用于化妆品样品处                             计算样品的细菌回收率=（A 样品/A 对照）×100%。
                理和计数培养。                                               当待测样品两个培养时间的细菌回收率均大于
                1.2.4  菌悬液细菌计数和吸光度的测定                             对应培养时间的标准回收率时，则判定为抗生素阴
                    挑取适量金葡菌接种到灭菌生理盐水中，振荡                          性，否则判定为抗生素阳性，即怀疑该样品非法添
                混匀后，作为标准菌液，分别取 0.5、1.0、1.5、2.0、                   加抗生素，需要使用国标方法进行进一步精确检测。
                2.5 mL 于 5 个灭菌试管中，加入 0.9%灭菌生理盐水
                                                                  2 结    果
                使溶液总体积达5 mL。取不同浓度的菌悬液各1 mL
                于试管中，加入0.5 mL灭菌生理盐水和4.5 mL液体培                     2.1  4种稀释液的中和效果比较
                养基，充分混匀，制成含等浓度梯度菌液的待测液。                               使用 4 种不同稀释液的 20 件样品的金葡菌回
                    以液体培养基为空白对照，5 个浓度的菌悬液                         收率结果见表2。
                为待测液，在 480 nm 波长下，使用紫外可见分光光                           结果显示，编号 1~14 的样品：使用 0.9%生理盐
                度计进行吸光度测定，每个样品测定 3 次，取平均                          水制备的样品加菌回收率为58%~89%，使用营养肉
                值，测定前用混合器将溶液混匀。同时，用生理盐                            汤制备的样品加菌回收率为66%~90%，使用SCDLP
                水对5个浓度的菌悬液进行梯度稀释并进行营养琼                            液体培养基制备的样品加菌回收率为 80%~102%，
                脂平板计数，平行制备3个平板。用Excel拟合该实                         使用 MLEB 制备的样品加菌回收率为 80%~104%，
                验条件下金葡菌菌液吸光度值和细菌数之间相关                             均符合《中国药典》2020年版的相关要求。编号15~20
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