Page 96 - 南京医科大学自然版

第45卷第2期
·236 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2025年2月

表2 微生物计数法适用性实验回收率 表 3 不同浓度金黄色葡萄球菌菌悬液的吸光度和菌落计
Table 2 Recovery rate of applicability experiment of 数结果
microbial counting method （%） Table 3 Absorbance and bacterial count results of Staphy⁃

Sample Normal Nutrient lococcus aureus suspension at different concentra⁃
SCDLP MLEB
number saline broth tions
10 75 83 84 83 Dilution degree Absorbance Bacterial count（×10 cfu）
10
20 87 88 93 92 5 0.162 1.8
30 89 87 95 102 4 0.318 3.5
40 78 86 102 98 3 0.431 5.2
50 79 88 94 91 2 0.536 6.8
60 87 90 92 98 1 0.618 8.5
70 86 85 92 96
曲线，建立的回归方程为 y=14.58x-0.86（r=0.994）。
80 78 76 93 86
由此可见，菌液细菌数和菌液吸光度之间呈线性相
90 85 85 94 95
关，在实验中可以通过测定菌悬液的吸光度以反映
10 73 77 81 83
11 77 74 87 83 菌悬液中的细菌数量。
12 58 66 80 85 2.3 3种抗生素对金葡菌的抑菌效果
13 87 89 97 104 不同浓度的氯霉素、氧氟沙星、头孢克肟加标
14 77 75 85 80 样液的金葡菌回收率见表4~6。结果表明在本实验
15 28 52 81 76
条件下，培养 45 min 时，氯霉素、氧氟沙星、头孢克
16 11 35 60 89
肟分别在 250 μg/g、10 μg/g、50 μg/g 时出现抑菌效
17 38 58 71 82
果，对应的细菌回收率分别为94%、95%、95%；培养
18 44 54 73 76
90 min时，氯霉素、氧氟沙星、头孢克肟分别在5 μg/g、
19 05 16 51 58
1 μg/g、1 μg/g 时出现抑菌效果，对应的细菌回收率
20 15 38 45 73
分别为 92%、93%、92%。在两个培养时间下，随着
的样品中：使用 0.9%灭菌生理盐水制备待测的样
抗生素浓度提高，细菌回收率呈下降趋势。
品，有 6 件加菌回收率低于 50%（编号 16~20）；使用
表4 不同浓度氯霉素加标样液的细菌回收率
营养肉汤制备待测液的样品中，有 3 件加菌回收率
低于50%（编号16、19、20）；使用SCDLP液体培养基 Table 4 Bacterial recovery rates of different concentra⁃
tions of chloramphenicol solutions （%）
制备待测液的样品中，有 1 件加菌回收率低于 50%
Concentration of Bacterial recovery rate
（编号 20），不符合《中国药典》2020 年版的相关要 chloramphenicol（μg/g） 45 min 90 min
求。在20件样品中，12件使用MLEB制备待检液的 1 100 100
样品加菌回收率最高（更接近 100%），且金葡菌回 5 100 092
收率均符合相关要求。由此可见，添加中和剂能 10 100 090
有效中和化妆品样品的抑菌性，其中 MLEB 对样 50 100 089
品中的防腐剂及其他具有抑菌效果成分的中和效 250 094 087
果最佳。 1 000 093 084

2.2 金葡菌菌液吸光度和细菌数的相关性 2.4 本方法的最低检测量说明和判定标准建立
根据朗伯⁃比尔定律，待测样品溶液的浓度过低 由于本研究建立的方法不是针对单个抗生素
或过高，均会影响紫外分光光度计测定的吸光度值 绝对量的检测，而是对抑菌效果的反映，无法提供
的准确性，吸光度值在 0.2~0.8 时，测定的误差相对 类似仪器分析中的检出限或最低定量浓度等指标，
较小，准确性好，因此需选择合适浓度的菌悬液进 但可根据样品的细菌回收率与抗生素加标液的标
行梯度稀释。实验测得的不同浓度金葡菌悬液的 准回收率比较，反映抑菌物质存在的浓度，从而指
吸光度值和营养琼脂平板细菌计数结果见表3。 定最低检测量 ［10］ 。根据 2.3 中的数据，培养 90 min
以 480 nm 波长下金葡菌悬液的吸光度值为横 时，细菌回收率出现下降时对应的抗生素浓度更
坐标，平板计数得到的细菌数为纵坐标，拟合标准 低，而本方法的应用场景为样品初筛，能检出更低