Page 10 - 南京医科大学自然版

第45卷第7期
·908 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2025年7月

1.2.6 细胞Transwell实验 采用集落形成实验进一步验证了乳酸钠对细胞增
将MDA⁃MB⁃231和HCC⁃1806细胞以1×10 个/孔 殖能力的作用。结果表明，乳酸钠处理组的集落数
5
接种于 8 μm 孔径 Transwell 上室（含 200 μL 无血清 量显著高于对照组（图1B），差异有统计学意义（P <
培养基），下室添加含 10% FBS 的 500 μL 完全培养 0.05）。这表明外源性乳酸钠能够显著促进TNBC细
基作为趋化诱导。37 ℃培养24 h后，移除上室未迁 胞的增殖能力。
移细胞，4%多聚甲醛固定 15 min，0.1%结晶紫染色 为了评估乳酸对 TNBC 细胞迁移能力的影响，
20 min，PBS冲洗后于倒置显微镜下随机选取 5个视 分别在 0 和 24 h 拍摄并分析了细胞迁移情况。结
野计数下室膜面迁移细胞数。实验设置3个复孔，独 果显示，相比对照组，外源性加入乳酸的 TNBC 细
立重复3次。 胞在 24 h 后的划痕愈合率明显增加（图 2A）。此

1.3 统计学方法 外，Transwell 小室实验也显示，乳酸处理组的迁移
实验数据采用GraphPad Prism 9及SPSS 19.0进 细胞数显著增多（图2B），且差异有统计学意义（P <
行统计学分析，结果以均值±标准差（x ± s）表示。组 0.05）。为了评估组蛋白乳酸化是否参与其中，在细
间差异评估采用 Student’s t 检验或单因素方差分 胞外梯度加入乳酸来检测细胞整体乳酸化水平是
析，P < 0.05为差异有统计学意义。 否改变（图 2C）。显然，10 mmol/L 外源乳酸补充显
著增强了泛乳酸化水平。这一结果提示，乳酸可能
2 结 果
通过调节乳酸化相关通路或信号转导途径，进一步
2.1 外源性乳酸钠通过乳酸化修饰促进TNBC细胞 促进了TNBC的恶性生物学行为。
增殖及迁移 2.2 IGF2BP3敲低抑制TNBC的乳酸化修饰
与其他乳腺癌亚型相比，TNBC 对糖酵解途径 前期研究已经发现IGF2BP3在TNBC组织中存
的依赖性更为显著，表现为多个关键糖酵解酶和转 在特异性高表达特征 ［19］ 。为探究IGF2BP3对TNBC
运蛋白的上调，伴随葡萄糖摄取和乳酸分泌的增 细胞组蛋白乳酸化修饰的调控作用，本研究选取了
加。为了进一步探讨TNBC细胞分泌的大量乳酸对 2个IGF2BP3高表达的TNBC细胞系（MDA⁃MB⁃231
细胞的作用，并排除 pH 变化对细胞行为的潜在影 和HCC⁃1806），根据2种细胞系的最佳MOI值，分别
响，在 MDA⁃MB⁃231 TNBC 细胞系的完全培养基中 转染了 2 种特异性靶向 IGF2BP3 的 shRNA 慢病毒
外源性添加了 5 mmol/L 乳酸钠。乳酸钠作为乳酸 载体（shIGF2BP3⁃1 和 shIGF2BP3⁃2）以及阴性对照
的钠盐形式，可以避免乳酸引起的酸性变化，从而 载体（shRNA⁃NC），成功构建了 IGF2BP3 稳定敲低
［18］
确保乳酸的作用能够被准确评估 。 的细胞模型。
CCK⁃8法评估外源性乳酸钠（5 mmol/L）对MDA⁃ 采用RT⁃qPCR 和Western blot 验证基因沉默效
MB⁃231 TNBC 细胞增殖能力的影响，结果显示，与 率，结果显示与 shRNA⁃NC组相比，shIGF2BP3组细
未处理的对照组（231 WT）相比，乳酸钠处理组在 胞的 IGF2BP3 mRNA 及蛋白表达水平均显著下降
120 h 内的相对增殖能力显著增强（图 1A）。此外， （图 3A、B），且差异有统计学意义（P < 0.05）。进一

A 231 WT B MDA⁃MB⁃231 400 *
231 WT+5 mmol/L NaLa 300
*
10
Relative proliferation 5 Colony number 200 0
100

0 231 WT 231 WT+5 mmol/L NaLa 231 WT 231 WT+
24 48 72 96 120
Time（h） 5 mmol/L NaLa

A：Relative proliferation was assessed by CCK⁃8 assay in MDA⁃MB⁃231 cells. Results showed that 5 mmol/L NaLa significantly enhanced cell
*
proliferation. Compared to the 231 WT group，P < 0.05. B：Colony formation assay showed that 5 mmol/L NaLa treatment significantly increased
*
colony numbers in MDA⁃MB⁃231 cells. Compared to the 231 WT group，P < 0.05（n=3）.
图1 外源性乳酸钠促进TNBC细胞增殖
Figure 1 Exogenous sodium lactate promotes TNBC cell proliferation