Page 50 - 南京医科大学自然版

第45卷第7期
·948 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2025年7月

1.2.8 生物膜清除实验 圆形半透明斑块，边缘清晰明确，显示出强大的溶
将铜绿假单胞菌液用 LB 培养基 1∶100 传代后 菌活性（图 1）。
37 ℃摇约 3 h 达到对数生长期，接着进行 10 倍稀释
后作为形成生物膜的初始菌液，此时浓度约为 1×
7
10 CFU/mL。取96孔板，每个孔内分别加入100 μL
菌液和 100 μL 新鲜 LB 培养基，37 ℃孵育 24 h。第
2 天吸出培养液，用无菌 PBS 缓冲液清洗 2 次，此时
生物膜已形成且黏附于孔壁及孔底。对照组继续加
入LB培养基而实验组加入噬菌体PAPX液，共培养
6 h 后，取出并弃去培养液，然后使用0.1%结晶紫染
液进行生物膜染色10 min，用流动水冲去多余染液，
再次室温晾干，最后将已染色的生物膜用95%乙醇溶 The black arrows indicate the plaques formed by phage PAPX. The
解，置于酶标仪（Biotek synergyMX）测量 D（600 nm） translucent plaques measuring approximately 2 mm in diameter with well⁃
值并记录。 defined edges highlight its lytic activity.

1.3 统计学方法 图1 噬菌体PAPX噬斑图
Figure 1 PAPX phage plaques were shown in a double ⁃
实验数据用GraphPad Prism10软件进行了统计
layer agar plate
学分析。数据以均值±标准误（x ± Sx）或均值±标准
差（x ± s）表示，两组数据组间比较采用非配对 t检 2.2 噬菌体PAPX针对各类临床菌株显示出广泛的
验。P < 0.05为差异有统计学意义。 裂解效应
为探索噬菌体PAPX 的潜在临床应用前景，对
2 结 果
24 株不同的铜绿假单胞菌临床菌株进行了点滴
2.1 环境中分离噬菌体的噬斑特性 实验，以评估其裂菌能力 ［20］ 。结果表明 PAPX 对临
以土壤中分离出的一种低毒力药敏性铜绿假 床菌株具有广谱裂解活性，能裂解 24 株菌株中的
单胞菌为宿主，从南京医科大学天元湖分离出了 1 17 株，在宿主范围上很可能超过了之前报道的一
株针对其裂解的新型噬菌体并命名为PAPX。双层 些噬菌体，表明它具有广泛的临床应用潜力（表 1、
琼脂平板显示，噬菌体PAPX形成了直径1~2 mm的 图 2）。

表1 噬菌体PAPX对临床菌株裂解效应
Table 1 Lytic activity of PAPX on clinical strains
Lytic activity
Clinical strains Lytic effect［n（%）］
++ + -
Sensitive strains 8 1 1 9.00（90.00）0
Multidrug⁃resistant P. aeruginosa（MDRPA） 2 1 0 3.00（100.00）
Carbapenem resistant P. aeruginosa（CRPA） 2 3 6 5.00（45.45）

++ + -

A B C
Lytic effect representative images. A：“++”indicates a stronger lytic effect. B：“+”indicates a moderate lytic effect；C：“-”signifies no lytic activity
（scale bar=1 cm）.
图2 噬菌体PAPX裂解能力示意图
Figure 2 Cleavage capacity of phage PAPX