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第45卷第7期
               ·946 ·                            南 京    医 科 大 学 学         报                        2025年7月


              associated infections.
             ［Key words］ Pseudomonas aeruginosa；bacteriophage；phage therapy；biofilm
                                                                            ［J Nanjing Med Univ，2025，45（07）：945⁃953］






                  铜 绿 假 单 胞 菌（Pseudomonas aeruginosa，P.
                                                                1  材料和方法
              aeruginosa）是假单胞菌科（γ⁃变形杆菌属）的一种
              革兰阴性杆菌，在自然界中广泛存在，属于机会性                            1.1  材料
              致病病原体，主要侵染免疫力低下的患者，包括囊                            1.1.1 菌株

              性纤维化、烧伤、癌症、慢性阻塞性肺疾病（chronic                            宿主铜绿假单胞菌是实验室前期从校园土壤
              obstructive pulmonary disease，COPD）的患者，或因         中分离得来，是对各种经验性治疗铜绿假单胞菌的
              严重感染（如COVID⁃19）而需要机械通气的患者                 ［1-4］ 。  抗生素均敏感的低毒性菌株。宿主菌谱探索实验
              铜绿假单胞菌是医院获得性感染的主要致病菌，                             由南京医科大学附属第一人民医院检验科刘根焰
              给公共卫生领域带来了极大的负担，当前抗生素                             课题组协助完成，所用临床菌株是从患者体液样本
              仍是针对铜绿假单胞菌的主要治疗策略，可以单                             中分离得到的铜绿假单胞菌，储存于江苏省妇幼保
              独使用或联合几种不同的抗生素使用以期获得更                             健院检验科细菌库，标准株 PAO1 由南京医科大学
              好的杀菌效果       ［2，5-6］ 。然而，不当使用抗生素导致                第一附属医院检验科赠予。实验已通过南京医科
              多重耐药菌的分离逐年增加，自 2017 年起，铜绿假                        大学第一附属医院伦理委员会审查，伦理批准号：
              单胞菌就被世界卫生组织列入优先关注的细菌名                             2024⁃SR⁃075。水样本采自于南京医科大学江宁校
              单之一，因此迫切需要替代治疗方法来应对这一                             区天元湖。
              严峻挑战    ［7-8］ 。                                   1.1.2 试剂与耗材
                  噬菌体是一类专门感染细菌的病毒，由于其独                               琼脂粉、营养肉汤（luria⁃bertani，LB）培养基（青
              特的宿主特异性、快速复制能力和在各种环境中的                            岛海博生物技术有限公司）；胰蛋白胨、酵母粉、脑心
              耐受性，噬菌体成为临床抗生素耐药菌治疗的潜在                            浸出液肉汤（brain⁃heart infusion，BHI）培养基（Oxoid
              解决方案    ［9-11］ ，如对包括铜绿假单胞菌在内的多重                   公司，英国）；氢氧化钠、浓盐酸、二甲基亚砜、结晶
              耐药菌（multi⁃drug resistance，MDR）的治疗。已有              紫、甲醇（上海国药集团化学试剂有限公司）。氯化
              不少实例证明了噬菌体疗法的有效性，例如我国早                            钠⁃硫酸镁（sodium chloride magnesium，SM）缓冲液
              在 1958 年，由余㵑教授牵头组织了从环境中分离                        （上海生工生物工程技术服务有限公司）；0.45 μm
              噬菌体应用于烧伤患者的铜绿假单胞菌感染治                              无 菌 膜（Millipore 公 司 ，美 国）。 聚 乙 二 醇 8000
              疗，获得了良好的效果，患者成功治愈出院                     ［12-15］ 。  （Bioshark 公司，美国）；DNA/RNA 提取试剂盒（北京
              然而，截至2024年11月，在美国国家生物技术信息                         天根生化科技有限公司）。
              中心（National Center for Biotechnology Information，  1.1.3 仪器与设备
              NCBI）分类数据库的24 419个条目中，仅有1 600个                         5810R 台式高速冷冻离心机（Eppendorf 公司，
              铜绿假单胞菌特异性噬菌体被收录，表明具有临床                            德国）；超净工作台（ESCO公司，新加坡）；高速大容
              用途的噬菌体少，迫切需要从自然环境中分离强效                            量离心机（Superma TOMY 公司，日本）；空气恒温摇
              裂解性噬菌体。                                           床（上海新苗医疗器械制造厂）；智能生化培养箱
                  由于噬菌体种类繁多，来自不同环境的噬菌                          （宁波江南仪器厂）；DELTA320pH仪（Mettler Toledo
              体往往表现出独特的生物学特性和遗传特征。                              公司，瑞士）；80 ℃超低温冰箱（山东海尔公司）；透
              本研究纯化了一株从南京医科大学天元湖中分                              射电子显微镜（Thermo Fisher Scientific公司，美国）。
              离到的广谱铜绿假单胞菌噬菌体，通过分析该噬                             1.2  方法
              菌体基因组、解析生物学性状及生物膜清除能                              1.2.1 噬菌体的富集与分离
              力，揭示了其在铜绿假单胞菌感染治疗中的潜在                                  从南京医科大学天元湖采集的污水样本中分
              应用前景。                                             离出铜绿假单胞菌的特异性噬菌体。样品经定性
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