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第46卷第10期 南京医科大学学报（自然科学版）
2026年10月 Journal of Nanjing Medical University（Natural Sciences） ·1437 ·

·专题研究：生殖医学·

PUS7通过mRNA假尿嘧啶化调控胚胎发育过程中神经谱系分

化平衡

王新新 ，黄伯贤 1，2* ，陆嘉逢 1*
1，2
苏州市立医院生殖遗传中心，南京医科大学生殖医学与子代健康全国重点实验室苏州分中心，江苏 苏州 215002；南京医
1 2
科大学生殖医学与子代健康全国重点实验室，江苏 南京 211166

［摘 要］ 目的：探究假尿嘧啶合成酶7（pseudouridine synthase 7，PUS7）对小鼠胚胎干细胞（mouse embryonic stem cell，mESC）
神经谱系分化的影响，并解析mRNA假尿嘧啶化在该过程中的调控作用。方法：采用CRISPR/Cas9技术构建Pus7敲除小鼠胚
胎干细胞模型，并通过 qRT⁃PCR、Western blot、免疫荧光、CCK⁃8 及细胞周期流式分析等方法检测Pus7缺失对 mESC多能性、
增殖能力和细胞周期分布的影响；结合拟胚体（embryoid body，EB）分化、神经外胚层定向分化系统评估Pus7缺失对谱系分化
倾向的影响，同时进行亚硫酸盐诱导缺失测序（bisulfite⁃induced deletion sequencing，BID⁃seq）与转录组测序（RNA sequencing，
RNA⁃seq）差异分析及通路富集分析，筛选潜在的mRNA假尿嘧啶化调控靶基因。结果：Pus7敲除未显著破坏mESC核心多能
性网络，但导致细胞增殖能力下降，并伴随 G1 期延长。敲除细胞在拟胚体自发分化过程中表现为外胚层（包含神经外胚
层）相关程序增强；在神经外胚层定向分化过程中，表现为神经祖细胞程序增强，而神经元细胞成熟相关程序受限。BID⁃seq
与 RNA⁃seq联合分析显示部分神经连接相关转录本如神经连接蛋白3（neurexin 3，Nrxn3）、去整合素样金属蛋白酶23（ADAM
metallopeptidase domain 23，Adam23）、丛蛋白D1（plexin D1，Plxnd1）、溶质载体家族1成员1（solute carrier family 1 member 1，Slc1a1）、
UNC⁃51样自噬激活激酶4（UNC⁃51 like autophagy activating kinase 4，Ulk4）和Abelson辅助整合位点1（Abelson helper integration
site 1，Ahi1）同时出现假尿嘧啶修饰水平下降和mRNA表达下调。结论：Pus7缺失通过延长G1期增强mESC向神经外胚层分
化的倾向，并通过降低神经连接相关mRNA的假尿嘧啶化及表达水平，导致神经祖细胞程序增强而后续成熟相关程序受阻，引
起胚胎发育过程中神经谱系分化失衡。
［关键词］ Pus7；小鼠胚胎干细胞；神经谱系分化；mRNA假尿嘧啶化
［中图分类号］ Q813 ［文献标志码］ A ［文章编号］ 1007⁃4368（2026）10⁃1437⁃13
doi：10.7655/NYDXBNSN260301

PUS7 regulates the balance of neural lineage differentiation during embryonic development
through mRNA pseudouridylation

1，2
Wang Xinxin ，Huang Boxian 1，2* ，Lu Jiafeng 1*
Reproductive Genetics Center Suzhou Municipal Hospital，State Key Laboratory of Reproductive Medicine and
1
2
Offspring Health（Suzhou Centre），Nanjing Medical University，Suzhou 215002；State Key Laboratory of Reproductive
Medicine and Offspring Health，Nanjing Medical University，Nanjing 211166，China

［Abstract］ Objective： To investigate the role of pseudouridine synthase 7（PUS7）in neural lineage differentiation of mouse
embryonic stem cells（mESCs）and to elucidate the involvement of mRNA pseudouridylation in this process. Methods：A Pus7 ⁃
knockout mESC model was generated using CRISPR/Cas9. qRT⁃PCR，Western blotting，immunofluorescence，CCK⁃8 assays，and flow
cytometric cell⁃cycle analysis were performed to evaluate the effects of Pus7 deficiency on pluripotency，proliferative capacity，and cell⁃
cycle distribution in mESCs. Embryoid body（EB）differentiation and directed neural ectoderm differentiation were conducted to
systematically assess the impact of Pus7 deficiency on lineage differentiation propensity. Differential bisulfite ⁃ induced deletion

［基金项目］ 国家自然科学基金（92168104，82071720）
∗
通信作者（Corresponding author），E⁃mail： 13770601687@163.com（ORCID：0009⁃0009⁃4087⁃5825）；huangboxiannj@163.com（OR⁃
CID：0000⁃0001⁃9913⁃9077）