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第41卷第10期 任宏艳，康美云，王子妤，等. PEI修饰的氢氧化铝纳米颗粒增强树突状细胞抗原提呈作用的
2021年10月 初步研究［J］. 南京医科大学学报（自然科学版），2021，41（10）：1425-1431 ·1427 ·

抗室温下孵育 1 h，TBST 洗膜 3 次后加化学发光试 OVA257⁃264 peptide）或CD3抗体（5 μg/mL）再刺激12 h
剂，在暗室中采用凝胶成像分析仪进行分析。 后，每孔加 50 ng/mL 佛波酯、500 ng/mL 钙离子载体
1.2.4 ELISA法检测DC负载HS/PEI⁃OVA后培养上 和 2 μmol/L 高尔基体抑制剂继续培养 6 h，收获细
清中IL⁃12的表达 胞，流式细胞术检测 CD8 IFN⁃γ T 细胞比率；刺激
+
+
mutuDC 细胞（2×10 个，50 μL/孔）和刺激剂 72 h后，收取培养上清，ELISA检测培养上清中IFN⁃
4
（IFN⁃α、R848）作用前后的 HS/PEI⁃OVA（10 μg/mL， γ的水平。CD3抗体作为阳性对照。
50 μL/孔）混合后放入96孔U底培养板37 ℃孵育6 h 1.3 统计学方法
后，收获细胞培养上清。ELISA 法检测培养上清中 实验数据用 GraphPad Prism 7.0 软件进行统计
IL⁃12的表达。 学分析，各组数据用均数±标准差（x ± s）表示，多组
1.2.5 CFSE标记的OT⁃Ⅰ T细胞增殖实验 定量资料比较采用单因素方差分析（one⁃way ANO⁃
取OT⁃Ⅰ小鼠脾脏细胞加入CFSE染料（终浓度 VA）检验，多组间数据两两比较采用 LSD 法。两组
10 μmol/L），37 ℃孵育 10 min，加入 5 倍体积的预冷 定量数据比较用 t 检验。P < 0.05 为差异有统计学

PBS，冰上放置 5 min，低温离心 10 min 后以 RPMI⁃ 意义。
1640培养液重悬至4×10 个/mL；2×10 个DC分别与
6
5
2 结 果
PEI⁃OVA、HS⁃OVA、HS/PEI⁃OVA（10 μg/mL）于37 ℃
共孵育6 h后与上述CFSE标记好的OT⁃Ⅰ小鼠脾脏 2.1 HS/PEI 显著增强 mutuDC 对 OVA 蛋白的抗原
细胞（4×10 个）混合37 ℃共孵育5 d，流式细胞术检 提呈作用
6
测CFSE标记的OT⁃Ⅰ T细胞的增殖。 为了验证 HS/PEI 在 DC 抗原提呈中的作用，将
+
+
1.2.6 HS/PEI⁃OVA 免疫后小鼠体内 CD8 IFN⁃γ T 不同浓度（0.001、0.003、0.010、0.030、0.100、0.300、
细胞比率及特异性T细胞分泌IFN⁃γ的检测 1.000、3.000、10.000、30.000、100.000、300.00 μg/mL）
C57BL/6小鼠左下侧腹部下注射接种B16⁃OVA 的 PEI、HS、HS/PEI 分别与 OVA 蛋白（10 μg/mL）室
细胞（2×10 个/100 μL）。待移植瘤生长的第7天，移 温共孵育 1 h，mutuDC 负载 PEI⁃OVA、HS⁃OVA、HS/
5
植瘤有米粒大小时，随机分组，每组5只，两侧腹股沟 PEI⁃OVA 后与 B3Z 细胞 37 ℃孵育过夜，CPRG 法检
淋巴结注射 OVA、HS⁃OVA、HS/PEI⁃OVA（每侧 15 测 DC 对抗原的提呈能力。结果发现，随着纳米颗
μg/15 μL），以PBS 作为对照组；第12天尾静脉注射 粒浓度上升，与 PEI⁃OVA、HS⁃OVA 组相比，HS/PEI⁃
DC⁃OVA、DC⁃HS⁃OVA、DC⁃HS/PEI⁃OVA 疫苗（每只 OVA组的吸光值显著上升（图1A、B）。并且当纳米
6 6
5×10 个/500 μL），对照组注射 DC⁃PBS（每只 5×10 颗粒浓度为 3 μg/mL 时，mutuDC 负载 HS/PEI⁃OVA
个/500 μL）。第16天，取小鼠脾脏和淋巴结细胞，含 对B3Z细胞的激活已显著高于其他组（图1B），故在后
10%胎牛血清的RPMI⁃1640重悬细胞后放入48孔板 续实验中，OVA蛋白浓度皆为10 μg/mL，纳米颗粒浓
（每孔 2 × 10 个/mL），每孔加 SIINFEKL（1 μg/mL， 度皆为 3 μg/mL。提示 HS/PEI 可显著增强 mutuDC
6
A B
2.5 2.5
HS/PEI⁃OVA
**
nm ） 1.5 PEI⁃OVA nm ） 1.5 *
HS⁃OVA
2.0
2.0
（ 595 1.0 （ 595 1.0
D D
0.5 0.5
0.0 0.0
mutu DC/peptide
B3Z+OVA
300.000
mutu DC/OVA
0.001 0.003 0.010 0.030 0.100 0.300 1.000 3.000 10.000 30.000 100.000 B3Z only mutu DC/PBS PEI⁃OVA HS/PEI⁃OVA PBS peptide
HS⁃OVA
纳米颗粒（μg/mL）
A：不同浓度纳米颗粒与 OVA 蛋白（10 μg/mL）联合后，DC 提呈能力的变化；B：纳米颗粒浓度为 3 μg/mL 时，DC 分别负载 PEI⁃OVA、HS⁃
OVA、HS/PEI⁃OVA后对OVA的提呈能力。两组比较，P < 0.05，P < 0.01，n=3。
*
**
图1 CPRG法检测DC分别负载PEI⁃OVA、HS⁃OVA、HS/PEI⁃OVA后对OVA的提呈能力
Figure 1 The efficiency of OVA cross⁃presentation by DCs loaded with PEI⁃OVA，HS⁃OVA or HS/PEI⁃OVA was deter⁃
mined by CPRG assay