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第41卷第10期
·1428 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2021年10月

对OVA抗原的提呈能力。 OVA 后泛素化 OVA 蛋白的表达明显高于 PEI⁃OVA
为了探讨 HS/PEI 增强 DC 抗原提呈作用的机 和HS⁃OVA组（图2A）。
制，mutuDC 与 PEI⁃OVA、HS⁃OVA、HS/PEI⁃OVA 于 成熟的DC 分泌多种细胞因子，其中IL⁃12可通
37 ℃共孵育 6 h 后加入 PFO 处理 DC。课题组以往 过促进交叉提呈诱导有效的T细胞应答 ［13-14］ 。为进
研究已证实泛素化蛋白能增强DC的交叉提呈刺激 一步探讨HS/PEI⁃OVA刺激对DC分泌IL⁃12的影响，
特异性T细胞活化 ［12］ 。因此我们运用泛素化蛋白纯 将 mutuDC 分别与 PEI⁃OVA、HS⁃OVA、HS/PEI⁃OVA
化工具 Vx3GFP 融合蛋白从上述 PFO 处理的 DC 上 于37 ℃共孵育6 h后收取上清，ELISA检测细胞培养
清液中富集泛素化蛋白，Western blot检测其中泛素 上清中IL⁃12的表达。结果显示，HS/PEI⁃OVA 刺激

化 OVA 蛋白的表达。结果显示，DC 负载 HS/PEI⁃ DC分泌IL⁃12的水平明显高于其他两组（图2B）。
A 500 000 * B **
PEI⁃OVA HS/PEI⁃OVA 400 000 * 300 *
HS⁃OVA
Ub⁃OVA相对表达量 300 000 （ pg/mL） IL⁃12 200

200 000
100
100 000
0
PEI⁃OVA HS⁃OVA HS/PEI⁃OVA 0
45 kDa- Ub⁃OVA PEI⁃OVA HS⁃OVA HS/PEI⁃OVA
A：Western blot 检测 DC 分别负载 PEI⁃OVA、HS⁃OVA、HS/PEI⁃OVA 后 PFO 提取液中泛素化 OVA 蛋白的表达；B：ELISA 检测 DC 分别负载
PEI⁃OVA、HS⁃OVA、HS/PEI⁃OVA后培养上清中IL⁃12的表达。两组比较，P < 0.05，P < 0.01，n=3。
*
**
图2 HS/PEI增强DC抗原提呈能力及IL⁃12的分泌
Figure 2 Enhanced cross⁃presentation and secretion of IL⁃12 in DCs by HS/PEI
以上结果提示PEI修饰的经典纳米铝佐剂可显著 HS/PEI⁃OVA后与CFSE标记的OT⁃Ⅰ小鼠脾脏细胞
增强DC对抗原的交叉提呈，诱导有效的T细胞应答。 37 ℃共孵育5 d，流式细胞术检测OT⁃Ⅰ T细胞的增
2.2 IFN⁃α和 TLR 刺激剂 R848 对 DC 提呈 HS/PEI⁃ 殖。结果显示，DC 负载 HS/PEI⁃OVA 诱导 OT⁃Ⅰ T
OVA的影响 细胞的增殖（80.1%）明显高于 PEI⁃OVA 组（27.0%）
TLR 和 I⁃IFN 可调节 DC 的成熟、抗原提呈及其 和HS⁃OVA组（43.3%）（图4）。结果进一步证实HS/
诱导的抗病毒和抗肿瘤反应 ［15-17］ 。为检测TLR和I⁃ PEI 能显著增强 DC 交叉提呈抗原诱导特异性 T 细
IFN对DC提呈HS/PEI⁃OVA的影响，mutuDC负载刺 胞免疫应答。
激 剂（IFN ⁃ α、R848）作 用 前 后 的 HS/PEI ⁃ OVA 于 2.4 DC⁃HS/PEI⁃OVA 疫苗显著增强小鼠体内 CD8 +
37 ℃孵育6 h后收取上清，ELISA检测细胞培养上清 IFN⁃γ T细胞比率及特异性T细胞IFN⁃γ的分泌
+
中IL⁃12的表达；与B3Z细胞37 ℃孵育过夜后，CPRG 为了观察DC⁃HS/PEI⁃OVA疫苗诱导小鼠体内T
法检测DC对HS/PEI⁃OVA 的提呈能力。结果显示， 细胞活化的情况，我们建立小鼠B16⁃OVA黑色素瘤
与未刺激的 HS/PEI⁃OVA 组相比，IFN⁃α和 R848 刺 模型，第 7 天分别给予 OVA、HS⁃OVA 或 HS/PEI⁃
激组DC分泌IL⁃12的水平显著升高（图3A），且能进 OVA 淋巴结初次免疫，第 12 天 DC⁃OVA、DC⁃HS⁃
一步刺激 B3Z 细胞的活化（图 3B）。提示 IFN⁃α、 OVA 或 DC⁃HS/PEI⁃OVA 尾静脉加强免疫（图 5A）。
R848可进一步增强DC对HS/PEI⁃OVA的交叉提呈， 第16天，取小鼠脾脏和淋巴结细胞，用SIINFEKL或
诱导高效的T细胞应答。 CD3抗体再刺激12 h后，流式细胞术检测CD8 IFN⁃
+
+
2.3 DC负载HS/PEI⁃OVA后显著促进OT⁃Ⅰ T细胞 γ T细胞比率。结果显示，HS/PEI⁃OVA 免疫组的淋
的增殖 巴细胞在体外通过 SIINFEKL 刺激后 CD8 IFN⁃γ T
+
+
DC 将抗原加工处理提呈给 T 细胞在刺激 T 细 细胞比率明显高于 OVA 组、HS⁃OVA 组和 PBS 对照
胞活化的同时也会促进 T 细胞的增殖。OT⁃Ⅰ转基 组（图 5B）。72 h 后，ELISA 检测细胞培养上清中
因小鼠CD8 T细胞的T细胞受体（TCR）特异性识别 IFN⁃γ水平。结果显示，与 PBS 和 OVA 组相比，HS⁃
+
H⁃2K ⁃OVA257- 264。将 DC 负载 PEI⁃OVA、HS⁃OVA、 OVA免疫组的IFN⁃γ水平有一定程度的升高；而HS/
b