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第41卷第10期 任宏艳，康美云，王子妤，等. PEI修饰的氢氧化铝纳米颗粒增强树突状细胞抗原提呈作用的
2021年10月 初步研究［J］. 南京医科大学学报（自然科学版），2021，41（10）：1425-1431 ·1429 ·

A PEI⁃OVA免疫组IFN⁃γ水平增高更显著（图5C）。以
2 000
上结果提示HS/PEI在体内可显著增强DC对抗原的
* 交叉提呈诱导有效的T细胞应答。
（ pg/mL） 1 500 * 3 讨 论

1 000
IL⁃12
500 一直以来铝佐剂作为免疫增强剂被广泛应用
于疫苗 ［3-7］ 。经典的含铝佐剂只能增强抗体反应，而
不能诱导有效的细胞免疫应答 ［18］ 。已有研究证实，
0
PBS IFN⁃α R848
氢氧化铝纳米颗粒具有很强的吸附能力，可以携带
B
2.5 * 可溶性蛋白 ［3，8］ 。PEI由于携带强正电荷在修饰纳米
*
2.0 颗粒时可增强其表面电荷 ［10］ 。本研究以 OVA 作为
nm ） 1.5 模型抗原，以 OVA 特异性 CD8 T 细胞杂交瘤 B3Z 为
+
（ 595 D 1.0 效应细胞，CPRG法检测B3Z细胞的活化。我们发现
低浓度的 OVA（10 μg/mL）与 HS/PEI 混合后即可以
引起较强的B3Z反应，提示PEI修饰的常规铝佐剂颗
0.5
粒可以显著提高DC抗原交叉提呈的效率。
0
PBS IFN⁃α R848 DC 中高浓度的抗原蛋白是诱导有效免疫应答
A：mutu DC 负载刺激剂（IFN⁃α、R848）作用前后的 HS/PEI⁃ 的关键。本课题组已经证实，与细胞裂解液相比，泛
素化蛋白能诱导更高效抗原交叉提呈 。Sims等
OVA，ELISA检测细胞培养上清中IL⁃12的表达；B：与B3Z细胞37 ℃ ［12］ ［19］
孵育过夜后，CPRG法检测DC对HS/PEI⁃OVA 提呈能力的变化。两
报道了一种可以结合泛素化蛋白的工具蛋白Vx3，本
组比较，P < 0.05，n=3。
*
图 3 IFN⁃α和 TLR 刺激剂 R848 对 DC 提呈 HS/PEI⁃OVA 课题组前期构建的Vx3GFP工具蛋白已成功分离肿
的影响 瘤细胞中的泛素化蛋白 ［12］ 。膜孔形成蛋白 PFO 可
Figure 3 Cross⁃presentation of HS/PEI⁃OVA by DCs can 以穿透细胞膜并释放胞浆蛋白到培养基中 ［20］ 。因
be enhanced by IFN⁃α and TLR agonist R848 此，本研究通过 Western blot 检测了 PFO 处理的 DC

A
Negative PEI⁃OVA HS⁃OVA HS/PEI⁃OVA

7.5% 27.0% 43.3% 80.1%
CFSE

B
100 **
*
（ % ） 80
增殖率 60
40
20
0
HS/PEI⁃OVA
Negative PEI⁃OVA HS⁃OVA

DC负载PEI⁃OVA、HS⁃OVA、HS/PEI⁃OVA后与CFSE标记的OT⁃Ⅰ小鼠脾脏细胞37 ℃共孵育5 d，流式细胞术检测CFSE标记的OT⁃Ⅰ T细
胞的增殖（A）及统计图（B）。两组比较，P < 0.01，P < 0.001，n=3。
**
*
图4 DC负载HS/PEI⁃OVA后显著促进OT⁃Ⅰ T细胞的增殖
Figure 4 The proliferation of OT⁃I T cells induced by DCs loaded with HS/PEI⁃OVA