Page 29 - 南京医科大学学报自然科学版

第41卷第4期 张舒纯，张 昕，李景云，等. NTN1调控ERK信号通路拮抗PCBs暴露致视网膜神经节细胞发育异常［J］.
2021年4月 南京医科大学学报（自然科学版），2021，41（04）：496-502 ·499 ·

比例高于si⁃NC组，差异有统计学意义（图2C），提示 路来发挥作用。
NTN1 沉默可能使细胞停滞于 S 期。细胞凋亡检测 2.3 过表达NTN1对PCB1254暴露后RGC⁃5细胞功能
结果显示，沉默组与对照组相比无明显差异（图 及ERK信号通路的影响
2D），提示NTN1沉默对RGC⁃5细胞的凋亡无明显影 采用 NTN1 过表达慢病毒感染细胞，利用 RT⁃
响。CCK⁃8 实验结果表明，与 si⁃NC 组相比，72 h 时 qPCR 及 Western blot 检测感染效率，结果显示，lv⁃
沉默组中吸光度值相对倍数低于阴性对照组，差异 NTN1组NTN1 mRNA及蛋白表达水平与lv⁃NC组比
有统计学意义（图2E），提示NTN1沉默抑制了RGC⁃ 较均明显升高，提示NTN1成功（图3A、B）。细胞周
5细胞的增殖能力。 期实验结果显示，lv⁃NTN1+PCB 组 S 期细胞比例低
ERK信号通路蛋白水平检测结果显示，沉默组 于 lv⁃NC+PCB 组，差异有统计学意义（图 3C），提示
p⁃ERK 表达下降，而总 ERK 水平不变，差异有统计 NTN1 过表达可以逆转 PCB1254对细胞增殖及周期的
学意义（图2F），提示 NTN1有可能通过ERK信号通 影响。CCK⁃8结果显示，与空白组（blank）相比，PCB

A B
1.5 NTN1 blank si⁃NC si⁃NTN1 75 kDa 1.25
1.00
NTN1 mRNA 相对表达量 1.0 *** GAPDH 36 kDa NTN1/GAPDH 0.75 *

0.50
0.5
0.0 0.25
0.00
blank si⁃NC si⁃NTN1 blank si⁃NC si⁃NTN1
C blank si⁃NC si⁃NTN1 120
600 600 600 G2⁃M
G0⁃G1：27.7% G0⁃G1：27.5% G0⁃G1：25.9% 100 S
500 500 500 （ % ） G0⁃G1
S：31.2% 400 S：34.1% 400 S：38.5% *
400
G2⁃M：35.6%
G2⁃M：38.4%
细胞数 300 细胞数 300 细胞数 300 细胞比例 80
G2⁃M：41.1%
60
200 200 200 40
100 100 100 20
0
0 0 0 blank si⁃NC si⁃NTN1
0 22 64 96 120 160 192 224 256 0 22 64 96 120 160 192 224 256 0 22 64 96 120 160 192 224 256
DNA含量 DNA含量 DNA含量
D
blank si⁃NC si⁃NTN1 15
10 3 10 3 10 3
F1：2.69% F2：2.46% F1：1.67% F2：2.47% F1：2.24% F2：2.74%
（ % ） 10
2
10 10 2 10 2
PI 10 1 PI 10 1 PI 10 1 凋亡率 5
F3：86.77% F4：8.08% F3：87.11% F4：8.74% F3：87.64% F4：7.38%
10 0 10 0 10 0 0
blank si⁃NC si⁃NTN1
10 0 10 1 10 2 10 3 10 0 10 1 10 2 10 3 10 0 10 1 10 2 10 3
Annexin V⁃FITC Annexin V⁃FITC Annexin V⁃FITC
E F
4 blank p⁃ERK blank si⁃NC si⁃NTN1 44 kDa 1.0
si⁃NC
相对吸光度值 3 2 1 si⁃NTN1 *** β⁃actin 44 kDa p⁃ERK/ERK 0.8 ***
42 kDa
ERK
0.6
42 kDa
0.4
42 kDa
0.0
0 0.2
0 h 24 h 48 h 72 h blank si⁃NC si⁃NTN1
A：NTN1沉默后各组细胞内NTN1的mRNA 表达水平（n=9）；B：NTN1沉默后各组细胞内NTN1的蛋白表达水平（n=3）；C：NTN1沉默后的
细胞周期变化（n=3）；D：NTN1沉默后的细胞凋亡变化（n=3）；E：NTN1沉默后的细胞增殖变化（n=5）；F：NTN1沉默后对p⁃ERK及ERK信号分
子的影响（n=3）。与si⁃NC组比较，P < 0.05， P < 0.001。
***
*
图2 沉默NTN1对RGC⁃5细胞功能及对ERK信号通路的影响
Figure 2 Effect of NTN1 silencing on RGC⁃5 cell function and ERK signaling pathway