Page 34 - 南京医科大学学报自然科学版
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第41卷第4期
               ·504 ·                            南 京    医 科 大 学 学         报                        2021年4月


                  肝癌是一种常见消化系统来源肿瘤，其病死率                          常规、肝肾功能、降钙素原、凝血功能等指标未见明
              居全球恶性肿瘤病死率的第 4 位 ，中国恶性肿瘤                          显异常，Child⁃Pugh 分级为 A/B 级；③术前未接受放
                                            ［1］
              病死率的第 2 位 。肝癌恶性程度极高，病情进展                          化疗、靶向药物、免疫治疗；④术中能完整将肿瘤切
                             ［2］
              快，大部分发展隐匿，确诊时已属晚期，能接受根治                           除；⑤手术前后未出现严重感染、败血症、感染性休
              性手术治疗的患者仅为 20%~30% 。积极探索综                         克、多器官功能损伤。排除标准：①对洛铂药物过
                                             ［3］
              合治疗手段对肝癌治疗尤为重要。有研究显示，肝                            敏者；②患有严重心肺疾病等重要脏器功能不全者；
              动 脉 化 疗 栓 塞（transhepatic arterial chem otherapy   ③患有造血系统疾病、自身免疫性疾病或免疫缺陷
              and embolization，TACE）联合索拉菲尼相比单纯介                 病、中重度营养不良、糖尿病者。采用随机数法将患
                                              ［4］
              入治疗能明显提高患者 1 年生存率 ，奥沙利铂等                          者分为洛铂组42例，对照组41例。所有患者都签署
              系统性化疗方案也被用于治疗不适合手术切除或                             了知情同意书，其中洛铂组患者术后出现腹腔感染2
              有远处转移的肝癌患者           ［5-6］ 。传统大剂量化疗在取             例，对照组患者术后出现腹腔感染3例，肝肾综合征1
              得一定疗效的同时，不良反应及耐药性也随之增                             例，术后大出血1例，死亡1例，失访2例，排除出组后
              加，从而限制了洛铂等铂类细胞毒性抗肿瘤药物在                            洛铂组40例，对照组33例。
              临床的长期和广泛应用。有研究认为，肝癌的发                             1.2  方法
              生、发展及转归与机体免疫功能状态密切相关，铂                            1.2.1 治疗方案及观察指标
              类细胞毒性抗肿瘤药物可通过上调主要组织相容                                  洛铂组在常规手术操作结束后，将50 mg洛铂溶
              性复合体Ⅰ类（major histocompatibility complex Ⅰ，        解于100 mL灭菌注射用水行腹腔灌注，术后留置腹
              MHC⁃Ⅰ）和抗原加工机制的其他成分来增强宿主免                          腔引流管，6~7 h开放。对照组仅用灭菌注射用水冲
              疫力，并增加肿瘤微环境中免疫效应细胞与免疫抑                            洗腹腔，术后常规放置引流管。两组均在术后常规给
              制细胞的比例       ［7-8］ 。免疫检查点是抑制肿瘤免疫系                 予抗炎、保肝、营养支持等对症治疗。两组均于术
              统激活的重要环节，肿瘤组织中其表达通常上调，                            前1 d及术后第30天采血取血清，淋巴细胞及其亚群
              促使肿瘤细胞逃避宿主的免疫检测，程序性死亡受                            表面抗原表达采用直接免疫荧光标记全血溶血法，采
              体1（programmed cell death 1，PD⁃1）以及程序性死亡           用流式细胞仪对样品进行检测，计算出其中阳性细胞
              配体 1（programmed cell death 1 ligand，PD⁃L1）等免      的百分比。包括 CD3 、CD4 、CD8 、CD4 /CD8 比值、
                                                                                         +
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              疫检查点抑制剂（immune checkpoint inhibitor，ICI）          自然杀伤（NK）细胞及调节性T细胞（Treg）细胞。
              可以阻断肿瘤免疫逃避相关途径，增强宿主对肿瘤                            1.2.2 细胞培养及实验分组
                                                 ［9］
              的免疫反应及对肿瘤细胞的杀伤作用 。近年来                                  人类肝癌细胞系HepG2、SMCC⁃7721、Hep3B均
              已成为包括黑色素瘤和肺癌等恶性肿瘤的主要治                             购自上海中国科学院，在37 ℃、5%CO2条件下，以含
              疗手段   ［10］ 。肿瘤组织 PD⁃L1 表达量与疗效显著相                  有 10%胎牛血清和青链霉素（Gibco 公司，美国）的
              关 ［11-12］ ，是最早被认为可以预测PD⁃1/PD⁃L1抑制剂                DMEM 培养基（Life Technologise 公司，美国）培养。
              疗效的临床生物标志物。有研究显示，在肺癌、头                            2 d 传代 1 次，根据不同浓度洛铂（海南长安国际制
              颈部鳞癌中，铂类抗肿瘤药物可以上调肿瘤细胞抗                            药有限公司）处理，对照组加入 PBS，处理 24 h。
              原递呈及 PD⁃L1 表达，增强宿主免疫系统对肿瘤的                        AKT 抑制剂组为洛铂 16 μmol/L + MK2206（MCE 公
              杀伤作用以及提高ICI疗效           ［13-14］ ，但在肝癌中未见相         司，美国）1 μmol/L。
              关报道。因此，本文通过研究洛铂对肝癌细胞抗原                            1.2.3 实时荧光定量PCR（qPCR）
              递呈及PD⁃L1表达的影响，为肝癌治疗提供新思路。                              细胞的总RNA采用TRIzol法提取，测定RNA的
                                                                浓度及纯度。 PD⁃L1、GAPDH的mRNA按照常规方
              1  对象和方法
                                                                法 采 用 PrimeScriptRT Reagent 试 剂 盒（TaKaRa 公
              1.1  对象                                           司，日本）逆转录为cDNA 后，使用SYBR Green Mas⁃
                  此研究为前瞻性、单盲、随机研究，并经医院伦                         ter Mix 试剂盒（TaKaRa 公司，日本）以 qPCR 法检测
              理委员会同意。选取南京医科大学第一附属医院肝                            PD⁃L1 及 GAPDH 的相对表达量，PD⁃L1、GAPDH 引
              胆中心2019年1—12月接受肝癌切除手术83例。入                        物设计合成由南京Realgene公司完成。PD⁃L1正向
              选标准：①术前经病理活检、临床检验及影像学检                            引物：5′⁃TGGCATTTGCTGAACGCATTT⁃3′，反向引
              查考虑肝细胞肝癌，术后病理确诊；②术前检查血                            物：5′⁃TGCAGCCAGGTCTAATTGTTTT⁃3′；GAPDH
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