Page 42 - 南京医科大学学报自然科学版

第41卷第4期
·512 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2021年4月

织中高表达，107 个在癌组织中低表达（图 1A）。 表 1 miR⁃182 与 miR⁃93 在头颈鳞癌癌组织相对于癌旁组
Langevin等 ［16］ 培养了4种HNSCC细胞系和原代人牙 织的表达量
龈上皮细胞，通过超速离心法分离出所培养的细胞 Table 1 The expression levels of miR⁃182 and miR⁃93 in
上清液中的外泌体，并应用miRNA测序来全面表征 head and neck squamous cell carcinoma tissues
relative to paracancer
其miRNA含量，发现与正常的口腔上皮细胞外泌体
miRNA log2FC P值 FDR
相比，HNSCC 细胞的外泌体 miRNA 含量存在巨大
miR⁃182 1.031 3.05×10 -8 9.72×10 -8
差异。我们将筛选出的差异 miRNA 与 Langevin 等
miR⁃93 1.202 4.94×10 -16 3.48×10 -15
的研究结果进行比较，发现 miR⁃182 与 miR⁃93 在
HNSCC 组织及 4种HNSCC细胞系外泌体中均呈现 300
***
出高表达状态（表 1）。本课题组先前研究发现
miR⁃182 在 OSCC 癌组织中显著高表达（P＜0.05）， 200
而 miR⁃93 在 OSCC 癌组织与癌旁组织中的表达水 miR⁃182表达水平
平无显著性差异。因此我们选择 miR⁃182 进一步 100 ***
研究。

0
100 HOEC CAL27 HN6
与HOEC比较， P < 0.001，n=3。
***
图2 miR⁃182在CAL27、HN6以及HOEC中的表达情况
75 Figure 2 Expression of miR ⁃ 182 in CAL27，HN6，and
HOEC

-lgFDR 50 2.3 血清外泌体鉴定

运用ExoQuick试剂盒从OSCC患者及正常人血
清中提取外泌体，使用 Western blot 实验、透射电子
25
显微镜和 NTA 表征外泌体。Western blot 实验显示
血清外泌体组检测到外泌体标志性蛋白 TSG101 和
0 CD9 的表达，而血清上清液中没有检测到两者的表
-4 -2 0 2 4 6 达（图3A）。透射电子显微镜观察发现有40~150 nm
log2FC 大小的囊泡样结构（图 3B）。NTA 显示外泌体样本
图1 差异表达miRNA的筛选 中颗粒物大小分布的峰值是105 nm，符合外泌体的
Figure 1 Screening of differentially expressed miRNAs
粒径分布特点（图3C）。

2.2 miR⁃182在OSCC细胞中表达上调 2.4 miR⁃182在OSCC患者血清外泌体中的表达
通过培养OSCC细胞株HN6、CAL27及人正常口 使用 ExoQuick 试剂盒提取 17 例 OSCC 患者及
腔上皮细胞株 HOEC，运用 qPCR 检测发现 miR⁃182 18 例正常人的血清外泌体。通过 qPCR 检测发现，
在OSCC细胞株HN6、CAL27中表达显著上调（图2）。 OSCC 患者血清外泌体内 miR⁃182 的表达水平有升

A B C 4 105
外泌体 无外泌体血清 （ ×10 6 个/mL ） 3 75

CD9 24 kDa 2
颗粒数 1
44 kDa
TSG101 0
0 200 400 600
直径（nm）
A：蛋白免疫印迹实验检测出外泌体标志性蛋白；B：透射电子显微镜下观察外泌体形态（×26 000）；C：NTA观测外泌体的粒径分布。
图3 血清外泌体鉴定
Figure 3 Characterization of exosomes