Page 44 - 南京医科大学学报自然科学版
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第41卷第6期
·822 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2021年6月
PBS FITC c⁃Met⁃lgG1 c⁃Met⁃lgG1⁃rAGAP
1.0 K 1.0 K FITC 2.0 K FITC 800 FITC
FITC 2.97
800 2.45 800 1.5 K 59.6 600 51.7
HO8910 Coun1 600 Coun1 600 Coun1 1.0 K Coun1 400
400
400
500 200
200 200
0 0 0 0
3
1
0
0
2
3
1
2
4
1
1
4
2
3
0
3
4
0
4
2
10 10 10 10 10 10 5 10 10 10 10 10 10 5 10 10 10 10 10 10 5 10 10 10 10 10 10 5
FITC⁃A FITC⁃A FITC⁃A FITC⁃A
1.0 K 400
800 FITC FITC FITC FITC
0.015 600 0.35 0.85
800 2.45 300
600
IOSE386 Coun1 400 Coun1 600 Coun1 400 Coun1 200
400
200 200 100
200
0 0 0 0
1
0
2
3
4
1
0
2
4
3
4
1
3
2
0
2
3
0
1
4
10 10 10 10 10 10 5 10 10 10 10 10 10 5 10 10 10 10 10 10 5 10 10 10 10 10 10 5
FITC⁃A FITC⁃A FITC⁃A FITC⁃A
图7 流式细胞术检测c⁃Met⁃IgG1及c⁃Met⁃IgG1⁃rAGAP能特异性结合于卵巢癌细胞膜
Figure 7 Specific binding of c⁃Met⁃IgG1 and c⁃Met⁃IgG1⁃rAGAP to ovarian cancer cells detected by flow cytometry
A B
HO8910 IOSE386
40 c⁃Met⁃lgG1 ** 15
c⁃Met⁃lgG1⁃rAGAP c⁃Met⁃lgG1
PA⁃lgG ** * c⁃Met⁃lgG1⁃rAGAP
（ % ） （ % ） 10
30
PA⁃lgG
抑制率 20 ** 抑制率 5
10
0 50 100 150 200 0 50 100 150 200
浓度（μg/mL） 浓度（μg/mL）
A：c⁃Met⁃IgG1、c⁃Met⁃IgG1⁃rAGAP与PA⁃IgG对HO8910细胞增殖的影响；B：c⁃Met⁃IgG1、c⁃Met⁃IgG1⁃rAGAP与PA⁃IgG对IOSE386细胞增殖
的影响。两组比较，P < 0.05，P < 0.01（n=3）。
*
**
图8 CCK⁃8实验检测c⁃Met⁃IgG1、c⁃Met⁃IgG1⁃rAGAP和PA⁃IgG对卵巢癌细胞增殖的抑制作用
Figure 8 Effect of anti⁃tumor cytotoxicity of c⁃Met⁃IgG1，c⁃Met⁃IgG1⁃rAGAP and PA⁃IgG on proliferation of ovarian
cancer cells detected by CCK⁃8 test
HO8910 细胞中经抗体处理的细胞侵袭数均低于 替尼等多种酪氨酸激酶抑制剂的耐药发生有关 。
［19］
PBS组（P < 0.05），且 c⁃Met⁃IgG1⁃rAGAP抑制细胞穿 此外，c⁃Met 作为新的肿瘤治疗靶点已经应用于肝
膜的作用比 c⁃Met⁃IgG1 明显，差异有统计学意义 癌 ［20］ 、脑肿瘤 ［21］ 、鼻咽癌等多种恶性肿瘤的实验研
（P< 0.05）。而在 IOSE386 细胞中，不同处理组细胞 究。本研究是在前期实验室制备的全分子人源化
侵袭数量差异无统计学意义（图10）。 抗 c⁃Met 抗体的基础上，将抗体与抗肿瘤药物蝎毒
素相偶联，研究其对卵巢癌细胞的恶性行为的抑制
3 讨 论
效果。本研究通过构建 c⁃Met⁃IgG1 和 c⁃Met⁃IgG1⁃
c⁃Met 是异二聚体受体酪氨酸激酶（receptor rAGAP真核表达载体，电转染CHO⁃S细胞后筛选出
tyrosine kinases，RTK）亚家族的成员，并且是HGF的 稳定表达两种抗体的细胞株，经 AKTA 蛋白纯化系
受体 ［17］ 。HGF与其配体c⁃Met的结合可诱导多种复 统纯化得到抗体。细胞免疫荧光和流式细胞术证
杂的信号通路，促进肿瘤细胞的恶性行为 ［18］ 。另 实两种抗体均可与c⁃Met 阳性细胞系细胞膜上的c⁃
外，在癌细胞耐药机制研究中还发现 c⁃Met 可与各 Met 蛋白选择性结合。CCK⁃8 实验显示 c⁃Met⁃IgG1
种膜受体间发生交叉作用，而且与吉非替尼和厄洛 和 c⁃Met⁃IgG1⁃rAGAP 对卵巢癌细胞的增殖均有抑
