Page 70 - 南京医科大学学报自然科学版
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第41卷第6期
               ·848 ·                            南 京    医 科 大 学 学         报                        2021年6月


              statistically different genera between the two groups were Legionella，Methyloversatilis，Obscuribacterales__norank（P < 0.05）.
              Conclusion：The occurrence of potentially pathogenic microorganisms in these DUWLs demonstrated a potential infectious risk for
              both dental health care personnel and patients. Attention should be paid to the diversity of DUWL bacterial communities . It is
              necessary to proceed to regular water quality control of DUWLs.
             ［Key words］ propidium monoazide；high⁃throughput seguencing；dental unit waterlines；diversity of microbial communities
                                                                            ［J Nanjing Med Univ，2021，41（06）：847⁃855］






                  口腔综合治疗台水路系统（dental unit water⁃                并失去活性。因此，可以利用PMA对活、死菌具有选
                                                                                                      ［11］
              line，DUWL）是由相互连接的窄孔塑料管网组成，其                       择的特性，使死菌在DNA纯化过程中被剔除 。
              输送的水既作为口腔设备的冷却剂，同时也作为口                                 本研究将 PMA 与高通量测序技术相结合研究
                                 ［1］
              腔治疗期间的冲洗剂 。DUWL的特殊结构为微生                           DUWL 活菌微生物群落的构成和多样性，为后期研
              物的定植和生物膜形成提供了有利条件，已检测出细                           究提供参考依据，进而更好地评估DUWL 水质污染
              菌、真菌、病毒及原虫等多种微生物               ［2-3］ 。口腔综合治       的情况。
              疗台（dental chair unit，DCU）管道水中的微生物可通
                                                                1  材料和方法
              过口腔直接进入或气雾吸入等多种方式接触患者及
              牙科医务工作者。因此，口腔综合治疗台特定的部件                           1.1 材料
              及其中的微生物污染是导致交叉感染的可能来源。                            1.1.1 实验试剂
              严重的微生物污染可能导致医务人员和患者出现健                                 封口膜（BEMIS 公司，美国）；R2A 琼脂培养基
              康问题，特别是免疫缺陷的患者             ［4-5］ 。                （Oxoid 公司，英国）；PMA（Biotium，美国）；细菌基因
                                 ［6］
                  2010年，Singh等 报道南非的一名口腔医生可                     组 DNA 小量纯化试剂盒、rTaq DNA Polymerase（大
              能由于职业因素经常暴露在被军团菌污染的气溶                             连宝生物工程有限公司）；AxyPrep DNA 凝胶回收试
              胶中而死于军团菌感染。2012年，Ricci等 报道了                       剂盒（Axygen 公司，美国）。PMA 溶解于无菌 ddH2O
                                                    ［7］
              一名健康的老年女性患者在接受口腔治疗后感染                             中，配制20 mmol/L PMA溶液-20 ℃避光保存。
              血清Ⅰ型嗜肺军团菌而死亡。研究表明，DUWL 中                          1.1.2 实验仪器
              普遍存在一定的微生物污染 。在DUWL出水中检                                口腔综合治疗台（Sinora公司，德国）；需氧恒温
                                       ［8］
              测到内毒素浓度可达到1×10 EU/mL，DUWL出水形                      细胞培养箱（Shellab公司，美国）；超净工作台（苏州
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              成的气溶胶中也含有一定浓度的内毒素，平均浓度                            苏净安泰公司）；台式冷冻离心机（Heraeus 公司，德
              可以达100 EU/m ；且DUWL中细菌产生的内毒素极                      国）；超微量紫外可见光光度计（GE 公司，美国）；
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              可能在口腔手术中刺激组织释放炎性细胞因子，进                            GeneAmp 9700 PCR 仪（ABI 公司，美国）；QuantiFlu⁃
                                     ［9］
              而不利于组织的创口愈合 。                                     or ⁃ST 蓝色荧光定量系统（Promega 公司，美国）；
                                                                  TM
                  高通量测序技术已经成为微生态研究中较为                           Miseq高通量测序仪（Illumina公司，美国）。
              先进的检查手段，能更准确地检测出环境样品中的                            1.1.3 研究样本
              细菌种类。但细菌死亡后数天乃至数周内其胞内                                  选择南京医科大学附属口腔医院牙体牙髓病
              DNA 都能够保持相对完整，常规的分子生物学检测                          科及牙周病科 DCU 33 台，其中牙体牙髓病科 23 台
              技术无法区分所扩增的核酸片段的模板DNA来自于                           （E组），标记为E1~E23；牙周病科10台（P组），标记
              活菌还是死菌，也就无法排除样本中死菌和游离                             为 P1~P10。所有纳入研究的 DCU 均进行口腔常规
              DNA的干扰信息 。如何使用高通量测序技术选择                           门诊治疗超过 3 个月，且在取样前的 1 个月内未进
                             ［10］
              性地检测环境中的活性细菌群落的结构和多样性是                            行过管道维修。除此之外，排除在采样前 3 d 内接

              本研究的目的。叠氮溴化丙锭（propidium monoaz⁃                   诊过有艾滋病、肝炎等传染病史患者的DCU。所有
              ide，PMA）是一种新型的核酸结合染料，能够穿过受                        DCU的水路系统均连接过滤自来水作为水源水。
              损的细胞膜进入细胞内，在卤素光的作用下，PMA与                          1.2 方法
              胞内的DNA发生共价交联反应。同时，多余的游离                           1.2.1 水样采集
              PMA可在卤素光作用下与样本中的水进行交联反应                                于当天上午 8 点开诊前采样，采样时严格执行
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