Page 81 - 南京医科大学学报自然科学版

第41卷第7期 朱亚文，陈 忠. 栀子苷对1型糖尿病小鼠心肌损伤的保护作用和机制研究［J］.
2021年7月 南京医科大学学报（自然科学版），2021，41（07）：1006-1014 ·1011 ·

A B 1.5 # C 1.5
p⁃AMPK/AMPK * p⁃mTOR/mTOR
Con STZ STZ+GE25 STZ+GE50 # **
p⁃AMPK 62 kDa 1.0 1.0 ## ##
AMPK 62 kDa 0.5 0.5
p⁃mTOR 289 kDa
0 0
mTOR 289 kDa Con STZ STZ+GE25 STZ+GE50 Con STZ STZ+GE25 STZ+GE50

α⁃tublin 50 kDa
A：Western blot 检测 p⁃AMPK、AMPK、p⁃mTOR、mTOR 的表达；B：p⁃AMPK/AMPK 蛋白相对表达水平；C：p⁃mTOR/mTOR 蛋白相对表达水
平。与Con 组比较，P < 0.05，P < 0.01；与STZ 组比较，P < 0.05，P < 0.01（n=5）。
**
##
*
#
图5 栀子苷对p⁃AMPK、AMPK、p⁃mTOR、mTOR蛋白表达水平的影响
Figure 5 The effect of geniposide on the expression of p⁃AMPK，AMPK，p⁃mTOR and mTOR
选择高葡萄糖（33 mmol/L）模拟体内高血糖环境。 比，100 μmol/L与200 μmol/L的栀子苷预处理的细胞
单独用不同浓度栀子苷处理 H9C2 细胞 54 h 后，细 活力均明显增加（P < 0.05，图6C），100 μmol/L的栀子
胞活力未受到明显影响（图 6B）。用不同浓度的栀 苷预处理的细胞活力略高于200 μmol/L的栀子苷预
子苷预处理 6 h，之后与高葡萄糖（33 mmol/L）共同 处理的细胞活力，但差异无统计学意义（P > 0.05），本
孵育 48 h。与高葡萄糖（33 mmol/L）处理的细胞相 实验选用100 μmol/L栀子苷用于后续实验研究。

A B C
150 150 150
（ % ） ** *** （ % ） （ % ） ** ** # #
细胞活力 100 *** 细胞活力 100 细胞活力 100

50
50
50
0 0 0
NC 12.5 25.0 33.0 44.0 NC 0 20 40 80 100 200 NC 0 20 40 80 100 200
葡萄糖（mmol/L） GE（μmol/L） GE（μmol/L）
A：不同浓度葡萄糖对H9C2细胞活力的影响；B：不同浓度栀子苷对H9C2细胞活力的影响；C：不同浓度栀子苷对高葡萄糖（33 mmol/L）诱
导的H9C2细胞活力的影响。与NC 组比较，P < 0.01， P < 0.001；与GE（0 μmol/L）+ HG（33 mmol/L）组比较，P < 0.05（n=4）。
***
#
**
图6 不同浓度栀子苷及葡萄糖对H9C2细胞活力的影响
Figure 6 The effects of HG and GE on the cell viability of H9C2 cells
2.7 栀子苷能够激活H9C2细胞中AMPK介导的自噬 苷通过减轻心肌纤维化及减轻心肌结构异常从而
进一步研究栀子苷减轻糖尿病小鼠心肌自噬 减轻糖尿病所致的心肌损伤。本研究还显示，栀子
的机制。Western blot 结果显示，与 NC 组相比，HG 苷治疗激活心肌自噬至少部分是通过AMPK信号通
组 p⁃AMPK/AMPK 比值明显降低（P < 0.01），LC3B 路实现的。心肌纤维化是糖尿病心肌病的主要病
Ⅱ/Ⅰ比值明显降低（P < 0.05），Beclin1 蛋白表达水 理改变 ［17］ 。在本研究中，HE 染色显示，STZ 组小鼠

平 明 显 降 低（P < 0.01），而 P62 水 平 升 高（P < 表现出明显的心肌结构异常，包括心肌纤维断裂，
0.001）。与 HG 组相比，HG+GE 组 p⁃AMPK/AMPK、 细胞结构紊乱等，GE25 组和 GE50 组可以改善糖尿

LC3BⅡ/Ⅰ、Beclin1表达明显升高（P < 0.05），而P62 病引起心肌结构损伤。Masson染色显示STZ组小鼠
水平降低（P < 0.001）。AMPK 抑制剂 Compound C 观察到明显的胶原沉积增加，GE25 组和 GE50 组可
逆转了栀子苷的作用，HG+GE+CC 组 p⁃AMPK/ 以明显减少胶原沉积。免疫组化证实 GE25 组和
AMPK、LC3B Ⅱ/Ⅰ 和 Beclin1 表 达 水 平 明 显 降 低 GE50 组 Collagen Ⅰ和 Collagen Ⅲ的沉积减少。由
（P < 0.05），P62表达水平明显升高（P < 0.05，图7）。 此可见，栀子苷干预后可以减轻 1 型糖尿病小鼠心
肌纤维化，减轻心肌损伤。
3 讨 论
在心脏中，自噬不仅是维持心脏结构和功能的
本研究利用 1 型糖尿病小鼠模型，观察到栀子 一种稳态机制，而且对维持心肌细胞的完整性也非